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長裙組別
這個組別的競爭，林志玲有著天然的優勢，高挑身材輕松駕馭長裙絕無問題。特別是出席紅毯活動穿的一些華貴的長禮服，搭配簡潔的盤發、精致的裸妝，盡顯女神般的優雅氣質。
個子嬌小的小S很聰明地選擇了貼身剪裁的長裙款式，凸顯腰胸線條，再悄悄地將“恨天高”藏在裙擺內，隱形增高，亮相時氣勢居然一點不輸。而搭配復古的發型和妝容，將人們的視線往上半身轉移，讓人忽視了她身高上的不足。
小S這次算是失手了，且不說這套連身褲質感可疑，就說她脖子上的那個蝴蝶結，還有短褲下過時的黑色legging，就只能用“敗筆，累贅”來形容了。
個子不高的小S特別愛穿短裙，并且已經穿出心得。款式要簡單，長度要迷你，剪裁上偏愛貼身、開衩的款式，搭配亮眼的高跟鞋，簡潔的發型，女人味十足。如果嫌悶，就在肩位玩些設計，單肩款、墊肩款，總不會讓你發現其實她都在穿同類的裙子。
高挑的女孩穿連身褲特別好看，就算是闊腿腳設計都不能將她的氣勢壓垮，反而多了一分隨意和瀟灑。加上胸前小露春光的吊帶設計，就算不喜歡這種“油漆工褲子”的宅男也全無意見了。
擁有一雙長腿的林志玲每次穿短裙都能讓鎂光燈閃個不停。不過她挑選短裙的品位確實還有待磨練，常見她選擇一些隱藏身材的布袋款，又或者夸張皺褶的款式，如果不是她生得高挑，早已經被裙子壓垮了。
志玲姐姐偶爾嘗試帥氣的造型，背心款機車夾克，炭灰色牛仔褲都已經十分到位。只可惜一頭凌亂的長發無法演繹出利落的感覺，腳下的坡跟鞋也稍顯沉重。
相比之下，身為“臺灣最受歡迎牛仔褲”代言人的小S的演繹就輕松許多，水洗白牛仔褲十分時髦，把白T恤打結，露出小蠻腰既瀟灑又性感，當然，不要忘了拉長腿部線條的高跟鞋，這身造型把握了“輕松&時髦”兩大街拍精髓。
向小S學習
矮個女孩也很時尚
“越級”挑戰林志玲，小S居然立于不敗之地，這跟她精妙的搭配技巧不無關系，各位矮個子的MM，趕快來向S姐學兩招。
服裝要簡潔
小S的服裝多以短小、簡練的款式為主，拒絕繁瑣與厚重感。不論是裙裝還是褲裝，幾乎統統都短到膝蓋以上，大腿中央，這是揚長避短展現修長的致命武器，越短越能延長腿部的比例。這樣不僅展示出了性感的，更把視覺重心上移，讓那個人顯得更挺拔精神。所以，那些簡約款式的短小服裝，在小S的裝扮中備受鐘愛。
關 鍵 詞：運動生物化學；骨骼肌細胞；棕櫚酸；胰島素抵抗；電刺激；糖代謝；小鼠
中圖分類號：G804.7 文獻標志碼：A 文章編號：1006-7116（2016）06-0129-06
Effects of electric stimulation on lipid rich insulin resisting the
sugar metabolism of skeletal muscle cells
PAN Hong-ying1，XU Xiao-yang1，JIA Zhang-zhi2
（1.School of Physical Education，South China Normal University，Guangzhou 510006，China；
2. Sports Science Research Institute of Guangdong Province，Guangzhou 510100，China）
Abstract： By using palmitic acid to incubate C2C12 cells， the authors established a model of lipid rich insulin resisting skeletal muscle cells， so as to observe the effects of contraction triggered by a certain intensity of electric stimulation on the cells’ sugar metabolism. The authors used different gradient concentrations of palmitic acid to incubate 5d differentiated C2C12 cells for 16h， measured glucose remaining amount and cell activity in the cell culture fluid of various groups， selected an appropriate palmitic acid concentration to establish a model of insulin resisting the cells， which was induced by such a concentration， then divided the experiment into 4 groups： a control group （C）， an electric stimulation group （EPS）， a palmitic acid group （PA）， and an electric stimulation + palmitic acid group （EPS+PA ）， applied an intensity of （15 V， 30 ms， 2 Hz） of electric stimulation for 60min， collected the samples and measured glucose remaining amount， AMPK-α2 mRNA and GLUT4 protein expression levels in the cell culture fluid， and revealed the following findings： 1） Comparing the group incubated with 0.5 mmol/L palmitic acid for 16 h with group C， LDH and MTT had no significant change （P>0.05）， glucose remaining amount increased significantly （P0.05）； 2） Comparing group PA with group C， glucose remaining amount increased significantly （P
Key words： sports biochemistry；skeletal muscle cell；palmitic acid；insulin resistance；electric stimulation；glucose metabolism；mouse
胰島素抵抗（IR）是指胰島素的外周靶組織對胰島素的敏感性和反應性降低，導致生理劑量的胰島素產生低于正常值的一種病理狀態[1]。IR與葡萄糖代謝異常密切相關，因此改善胰島素抵抗及葡萄糖代謝紊亂，是防治2型糖尿病及相關代謝性疾病的重要途徑。骨骼肌作為機體最大的胰島素靶器官和葡萄糖利用的主要外周組織，是IR發生的主要場所。研究發現，長期高脂飲食或短期脂肪酸大量輸入，以及機體因增齡引起的退化，均可引起骨骼肌脂肪含量增加，導致出現富脂性胰島素抵抗[2-3]。
電刺激是運動生理中常用的刺激方法，目前己廣泛應用到與骨骼肌收縮有關的疾病預防和治療中。電刺激對已發生胰島素抵抗的骨骼肌細胞的作用如何，國內外相關的研究很少。因此，本研究以C2C12小鼠骨骼肌細胞為研究對象，利用飽和脂肪酸棕櫚酸（PA）孵育誘導建立富脂性胰島素抵抗細胞模型，電刺激引起骨骼肌細胞收縮，觀察收縮對富脂性胰島素抵抗的C2C12肌管的糖轉運能力的影響，為下一步深入開展骨骼肌細胞胰島素抵抗電刺激方面的研究提供參考。
1 材料與方法
1.1 C2C12細胞培養、分化
小鼠骨骼肌肌母細胞系C2C12細胞購自南方醫科大學，DMEM高糖培養基（含10%胎牛血清），37 ℃、體積分數5% CO2培養箱中培養，細胞生長密度達70%～80%時將所有細胞用0.25%胰蛋白酶消化后，以2×105/mL密度種到6孔培養板中，待細胞單層覆蓋培養板底面密度達95%左右，換成分化培養基（高糖DMEM，2%馬血清，質量分數1%青霉素/鏈霉素）開始進行分化培養，每天換液，并從加入分化培養基開始計算分化天數。
1.2 PA孵育建立IR骨骼肌細胞模型
細胞分化5 d后，換成1%BSA的低糖無血清培養液孵育12 h（饑餓處理）。培養板每孔分別加入0、0.25、0.5、0.75、1.0 mmol/L濃度的棕櫚酸（PA），孵育16 h，收取細胞和培養上清液。選取適當參數，建立IR細胞模型。
油紅O染色：PA孵育后，加入質量分數10%中性甲醛固定30 min，PBS沖洗3次，每孔加入新鮮配制的油紅O染液1 mL，室溫孵育2 h，觀察脂滴形成情況。棄去染色液，每孔加入1 mL質量分數4%的NP-40的異丙醇，反復吹打后每孔取出150 μL，按照南京建成生物工程研究所提供的脂質形成檢測試劑盒說明測定脂質含量。試劑盒由普利萊基因技術有限公司提供。
1.3 實驗分組和電刺激方案
饑餓處理后的肌管隨機分為4組，對照組（C組）、電刺激組（EPS組）、棕櫚酸組（PA組）、電刺激+棕櫚酸組（EPS+PA組）。C組和EPS組用分化培養基培養16 h，PA組和EPS+PA組用PA孵育16 h成IR肌管。 隨后分別對EPS組和EPS+PA組進行電刺激，強度設為15 V、30 ms、2 Hz，時間60 min，刺激結束立即收樣；C組和PA組直接收樣。測定相關指標。
1.4 細胞活性測定
細胞活力檢測試劑盒（MTT法）測定細胞活性，用酶聯免疫檢測儀（美國，BIO-RAD公司）570 nm處測定其光密度值，計算細胞存活率。乳酸脫氫酶（LDH）活性定量檢測試劑盒測定細胞膜完整性，440 nm波長處測光密度值，通過公式計算各組LDH濃度。試劑盒由南京建成生物工程研究所提供。
1.5 細胞培養液葡萄糖（G）剩余量測定
葡萄糖氧化酶-過氧化物酶法檢測上清液中剩余葡萄糖濃度，酶標儀測定550 nm處光密度值，通過公式計算葡萄糖含量。在棕櫚酸孵育結束前30 min加入100 nm的胰島素（Ins）溶液或加入同溶劑的胰島素對照品（除了不含胰島素，其他溶液成分一樣）刺激。
1.6 腺苷酸活化蛋白激酶α2（AMPK-α2）mRNA的測定
采用實時定量PCR方法測定C2C12肌管中AMPK-a2 mRNA水平，引物由上海生工生物有限公司設計，抗體由北京博奧森生物技術有限公司提供。Trizol法提取肌管總RNA，mRNA反轉錄合成cDNA，然后進行逆轉錄聚合酶鏈反應（RT-PCR）。AMPK-α2上游引物5’-TCCAAAGTCAGCTATCTTAGCGTT-3’，下游引物5’-CGTGGATTACTGTCACAGGCATAT -3’。內參上游引物5’-TGATGTCACGCACGATTTCC-3’，下游引物5’-ACACTGTGCCCATCTACGAGG-3’。在管中加20 μL反應體系，Hema3200基因擴增儀上反應。以GAPDH為內參，計算目的基因的相對表達量。
1.7 Western Blotting 測定葡萄糖轉運蛋白4（GLUT4）蛋白表達
收集細胞，加入裂解液，離心提取胞漿和胞膜蛋白。按照GLUT4蛋白檢測試劑盒說明書和檢測目的條帶大小來配制一定濃度的分離膠和5%濃縮膠。兔抗GLUT4，AMPK，一抗、二抗孵育后，TBST洗滌膜。使用ECL試劑盒發光，顯影，X線膠片壓片曝光，掃描定量各條帶的相對灰度值，β-actin為內參蛋白，“目的蛋白相對含量=目的蛋白灰度值/β-actin內參蛋白灰度值”。試劑盒由北京博奧森生物技術有限公司提供。
1.8 數據統計處理
SPSS17.0統計學軟件進行處理。所有數據以“ ±s”表示，單因素方差分析檢驗各組數據間差異的顯著性，P
2 結果及分析
2.1 不同濃度PA孵育后細胞活性和LDH活性變化
MTT法是檢測活細胞的數量和代謝活力的經典方法，MTT值下降，提示活細胞數量減少，細胞生長受抑制。表1所示：低濃度（0、0.25、0.5 mmol/L）PA孵育16 h，細胞活性均增加，與0 mmol/L PA孵育相比，0.25、0.5 mmol/L孵育后MTT值雖有降低，卻無顯著性差異（P>0.05），0.75、1.0 mmol/L孵育后，MTT值降低顯著（P
2.2 不同濃度PA孵育后C2C12肌管糖剩余量和脂質含量的比較
表2所示：16 h的PA孵育，濃度0.50、0.75和1.0 mmol/L上清中葡萄糖剩余量G與0 mmol/L相比顯著增加（P
2.3 電刺激IR肌管后葡萄糖剩余量、LDH活性、AMPK-a2 mRNA的變化
表3結果顯示：EPS組肌管培養液中葡萄糖剩余量明顯低于對照組（P
2.4 電刺激IR肌管，引起GLUT4蛋白表達的變化
圖2結果顯示：與C組相比，PA組膜GLUT4蛋白和總蛋白表達顯著性降低（P
3 討論
3.1 富脂性胰島素抵抗細胞模型的建立
研究骨骼肌富脂性胰島素抵抗發生機制，建立相關的胰島素抵抗模型尤為重要。分化后具有收縮功能的C2C12細胞，常被用做離體骨骼肌功能的研究。動物和人體實驗表明[2]，無論是通過脂質灌注還是慢性的高脂飲食，引起血中游離脂肪酸升高，均可導致骨骼肌出現富脂性胰島素抵抗。老年人易發生的胰島素抵抗也與骨骼肌線粒體功能異常，產生肥胖和脂質堆積有關[3]。在引起胰島素抵抗的脂肪酸中，又以長鏈飽和脂肪酸棕櫚酸最為典型[4]，且不同濃度的棕櫚酸對細胞的影響不同。在C2C12和L6細胞誘導分化前加入棕櫚酸孵育，可影響肌細胞分化，但分化后再加入棕櫚酸則不影響分化程度[5]。濃度為0.2～0.8 mmol/L的棕櫚酸孵育L6骨骼肌細胞8 h，細胞活性不變，但對棕櫚酸的吸收隨濃度增加[6]。而0.8、1.0 mmol/L濃度的棕櫚酸分別孵育到24和36 h，細胞活性出現降低[7]。也有研究發現0.75 mmol/L 棕櫚酸處理分化4 d的C2C12肌管16 h，GLUT4 mRNA水平和糖攝入均降低[8]。
本研究選取1 mmol/L以下的4個濃度梯度，孵育分化5 d的C2C12肌管16 h，發現，高濃度（0.75、1 mmol/L）的棕櫚酸孵育后，細胞活性明顯降低，低濃度（0.25、0.5 mmol/L）的棕櫚酸孵育不會引起細胞活性下降和膜損傷。各組上清中葡萄糖剩余量與對照組相比均顯著性增加。在PA孵育結束前30 min加入100 nmol/L胰島素溶液刺激后，低濃度（0.25 mmol/L） PA孵育的肌管葡萄糖剩余量與同濃度不加胰島素刺激的PA組相比顯著減少（P
3.2 電刺激對富脂性IR骨骼肌細胞葡萄糖代謝的改善作用
骨骼肌的收縮水平是底物代謝及轉錄事件的重要調節因子。不同的電刺激條件及強度會對骨骼肌細胞產生不同的影響[9]。Nedachi[10]認為40 V、60 mmol/L、2 ms、1 Hz的強度較適合研究C2C12肌管收縮反應時的代謝改變。Marotta[11]等以50 V、100 mmol/L、30 ms、3 Hz的強度電刺激C2C12 肌管90 min，發現肌管中糖原分解增加，糖原代謝相關酶活性改變。本研究前期研究發現，15 V、60 mmol/L、30 ms，3 Hz的強度刺激分化5 d的C2C12肌管120 min，細胞膜沒有明顯損傷，且能通過AMPK途徑增加肌管糖攝入和糖轉運[12]。因此，本研究仍采取同樣的強度，觀察電刺激對富脂性IR肌管的影響。
結果顯示：電刺激60 min后，各組間細胞活性和細胞膜完整性無顯著性差異（P>0.05），即此強度不會對細胞造成損傷，適合對富脂性IR細胞的研究。但電刺激IR組肌管培養液中的葡萄糖剩余量明顯低于對照組（P
3.3 電刺激對富脂性IR骨骼肌細胞糖代謝相關因子的調控
GLUT4是骨骼肌葡萄糖轉運的主要轉運因子，其在細胞膜上載體的數量與細胞葡萄糖最大轉運能力呈正相關關系[13]。胰島素和收縮作用均可以促進GLUT4 從細胞囊泡內向細胞膜的轉運。然而，兩者調節葡萄糖轉運則是通過不同的信號途徑完成的[14-15]。在本研究中，胰島素抵抗組GLUT4膜蛋白和總蛋白表達量都明顯下降，電刺激組總GLUT4蛋白表達量變化不大，但肌膜GLUT4蛋白表達量卻顯著性增加，提示胰島素抵抗時，骨骼肌肌管GLUT4 膜蛋白轉位減少，導致細胞內總 GLUT4蛋白貯存量降低。電刺激誘導的收縮可以促使骨骼肌細胞 GLUT4轉位，使骨骼肌細胞膜上轉運蛋白含量增加，從而增加機體轉運葡萄糖能力。在體研究也發現，當機體處于胰島素抵抗或2型糖尿病狀態時，骨骼肌中GLUT4蛋白表達明顯低于正常大鼠，而GLUT4的過表達則可以明顯改善胰島素抵抗的癥狀[16-17]。這與本研究的結果相吻合，其機制可能與運動激活細胞內的能量開關分子――腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK），后者進而促進GLUT4轉位有關。
為探討收縮運動對胰島素介導的葡萄糖攝取的變化，本研究檢測了骨骼肌收縮中對能量變化最敏感也最易被激活的AMPK-α2亞基。發現胰島素抵抗組AMPK-α2基因表達下降，而電刺激可引起其表達上升，提示適當的電刺激改善了胰島素抵抗造成的AMPK-α2表達下降。近來有關 AMPK在骨骼肌葡萄糖轉運中的機制仍未明了。有研究認為，無論低強度或是高強度運動，AMPK-α2基因的缺失并不影響GLUT4 的轉位[18]。也有研究認為，AMPK-α2是胰島素刺激下肌糖原合成的重要因子[19]，運動訓練激活AMPK-α2表達，可明顯改善高脂飲食導致的胰島素抵抗[20]。結合本研究實驗結果，可以表明，不論是動物實驗還是細胞研究，收縮運動均可激活胰島素抵抗骨骼肌AMPK-α2表達，調節糖代謝。但是阻斷AMPK-α2的表達，電刺激胰島素抵抗的骨骼肌細胞，是否影響GLUT4的糖轉運，尚需進一步實驗驗證。
棕櫚酸（0.5 mmol/L）孵育分化5 d的C2C12細胞16 h，可誘導其胰島素抵抗的發生。15 V、30 ms、2 Hz的強度電刺激60 min，可以提高富脂性IR骨骼肌對葡萄糖的吸收，增加AMPK-α2mRNA和GLUT4蛋白的表達，有助于改善富脂性IR骨骼肌細胞的糖代謝。
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此前，我的左手正護著一堆搖搖欲墜的課本，右手使勁地向后拽住課桌一角，企圖越過一級該死的臺階，結果這笨重的課桌卻因為我一腳絆在講臺下而與我做著方向相反的功。顯然我單薄的力量無法馴服這桀驁不馴、一意孤行的課桌，我眼睜睜地看著它向講臺英勇地撲去，仿佛聽到它撲通栽倒的聲音，仿佛看到書本嘩啦啦飛滿一地的場景，我的腦子里忽然閃過一句古文：“共工怒而觸不周之山，天柱折，地維絕，天傾西北……”這，這，這……后果太嚴重了！說時遲那時快，我懷著飛蛾撲火般壯烈的心情撲向了課桌……于是一個滑稽怪異的畫面出現了：我身體呈90度趴在一腳懸空的課桌上，雙手緊緊抱住桌肚，下巴死死抵住像泥鰍般想掙脫的課本，臉漲成絳紫色，眼神哀怨，神情凄苦，嘴里微弱地囁嚅著：“幫幫忙。幫幫忙……”幾個同學沖上來幫我解了圍。我立馬諂笑道：“謝謝啊，真是太感謝了！”
你以為這是在拍苦情戲嗎？NO，我們只是在換座位罷了。老師說，為了照顧同學們的眼睛，每個周末晚自習后要換座位，一組一組換，從右往左輪過去。老師耍我們搬桌子之前先搬書，可大家是能偷懶則偷懶，不能偷懶創造條件也要偷懶，于是就發明了連書帶桌一起搬的方法。只見全班同學吭哧吭哧地搬課桌，而我看起來卻像是被課桌搬。
人搬到哪，桌子也搬到哪，不離不棄，相追相隨。于是，大伙都對自己的課桌產生了濃厚的革命感情。課桌就像我們的另一半，不論它是平整光滑如新。還是疤痕交錯滄桑古舊，我們在開學時跟了它，就只能一直跟著它。用一句話來說：我愿意它成為我的課桌。從今天開始相互擁有、相互扶持，無論是好是壞，富裕或貧窮，疾病還是健康都彼此相愛、珍惜，直到畢業才能將我們分開……
我們每個周末帶著課桌從教室這一隅泅渡到那一隅，每天趴在它上面浴血奮戰、東征西討，只為與題目決個高下，或者偶爾趴在它上面睡得晝夜顛倒，留下一攤口水……它們知道我們的秘密，理解我們的悲喜，目睹我們的晨昏，也忍受我們的寂寥。
正因為對課桌有了感情，于是課桌就被我們同化了，即有什么樣的桌子就有什么樣的主人。比如：
周妞妞在自己的桌面上用鉛筆寫了滿滿一桌的蠅頭小楷“顧小北顧小北顧小北……”她是小四的忠實書迷。曾經花兩百多塊買了一本珍藏版的《爵跡》。她還經常沒事寫一些憂傷的詩，精致倒是精致，我卻是看不懂的。
小芳的桌子上寫了高考倒計時。我笑她：“咱們還有一年才高考，你急什么？”她正氣凜然地說：“我們離高三的日子，不遠了！”她的桌上還寫了幾行讓我觸目驚心的話：“做人要對得起自己的良心。你到這里來讀書，沒讀好，就是對不起自己的良心！”坐在她旁邊，看著她看完一本又一本參考書，做了一本又一本筆記，背完一個又一個知識點。我每天只能懺悔：“良心啊良心，我對不住你……”
溜溜的課桌是一個典型的兼容并包的神奇地方：課本、草稿紙、牛奶盒、廢紙巾、瓜子殼等，什么都有。我覺得如果她在桌肚里鋪上一個窩，就可以給老鼠接生養寶寶了。
Shopping在桌角堆了一堆小山似的書，每天就躲在書堆下面瘋狂地做數學題，導致她的地理分數連她數學分數的零頭都沒有。她在課桌另一角貼了一張花了一節地理課手繪的湖南地圖，這是她一心想要在畢業后去的地方，目的是去吃那里的臭豆腐。我對她的胸無大志感到無話可說。
辰辰的課桌右邊貼了一張課程表。每當我問：“下節什么課？”她總會溫婉地告訴我答案。她的課桌常年整整齊齊，井然有序，纖塵不染，就如她的人，細膩柔和，典型的江南女子。
而我的課桌，可謂是容貌常新。
記得剛開學時，我命中注定的這張桌子上貼著一張紙條，上面寫著一句話：人生就像刷牙，左手杯具右手洗具。我當時感慨萬千：坐這張桌子的前輩該是經歷了多少凄風苦雨。才能寫出這么有深度的話啊！可是，他已是苦媳婦熬成婆了，而我們這一批人，還得慢慢熬啊熬……
對自己的高中生活哀悼一番后，我撕去前人的痕跡，準備留下自己的專屬印記。我用鉛筆精雕細琢了兩個字：許嵩。再畫一個愛心，就對著它傻笑了大半節課。《宿敵》剛出來時，我在課桌上寫歌詞，一個字一個字，滿滿的都是歡喜。有時看小說看到精彩處，我也會隨手在課桌上記下美麗的詩句：“陌上人如玉，公子世無雙”“輕風涼夏閑筆意，風流風華皆是他”“自能窺宋玉，何必恨王昌”……