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第1篇：大二學習計劃書范文

【摘要】 目的 ：觀察腦活素（施普善）對慢性低氧高二氧化碳大鼠學習記憶功能的影響及大鼠海馬中caspase-3表達的變化，并探討可能的作用機制。方法 ：篩選八臂迷宮訓練后清潔級的雄性SD大鼠32只，隨機均分為對照組、模型組、施普善1 mL/kg組和施普善2.5 mL/kg組。采用八臂迷宮觀察干預前后大鼠空間學習記憶能力的變化，Western-blot法檢測大鼠海馬caspase-3蛋白的表達。結果：與對照組比較，模型組大鼠空間學習記憶能力下降，海馬中caspase-3明顯增高。與模型組大鼠比較，2種劑量施普善干預組大鼠的學習記憶能力明顯改善，且海馬中caspase-3的表達減少。結論：施普善具有改善慢性低氧高二氧化碳大鼠空間學習記憶作用，可能與抑制海馬中caspase-3表達有關。

【關鍵詞】 施普善；低氧；高二氧化碳血癥；學習記憶；半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3；海馬；大鼠

Abstract: Objective: To observe the effects of cerebrolysin on the learning-memory function and the changes of caspase-3 expression in the hippocampus of rats model with chronic hypoxia and hypercapnia，and to explore the probable mechanism. Methods: Thirty-two male S-D rats trained by eight-arm radial maze were pided into four groups: rats in the control group without treatment ；rats in chronic hypoxia and hypercapnia group were placed in the special closed cabin with hypoxia and hypercapnia for 8 hr a day， 6 day a week， 4 weeks and injected intraperitoneally with saline ；the rats in two treating group were injected intraperitoneally with 1 mg/kg and 2.5 mg/kg cerebrolysin， respectively. The learning-memory ability was measured using eight-arm radial maze and the expression of caspase-3 in the hippocampus was decteced with Western-blot.Results: Compared with the control group，the learning-memory ability was declined markedly and the expression of caspase-3 was increased significantly in chronic hypoxia and hypercapnia group. Nevertheless， the improvement of learning-memory and the less caspase-3 expression were observed in rats treated by two doses of cerebrolysin. Conclusion: Cerebrolysin may improve the learning-memory ability in rats with hypoxia and hypercapnia， which may be associated with the inhibition of the expressin of caspase-3 in the hippocampus.

Key words: Cerebrolysin；hypoxia；hypercapnia；learning-memory；caspase-3；hippocampus；rats

慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者存在不同程度的認知功能障礙[1]，但其機制目前尚不清楚。王小同等[2]在一系列研究中，證實慢性低氧高二氧化碳動物模型大鼠存在空間學習和記憶障礙。施普善含有85%的游離氨基酸和15%低分子量生物活性肽，極易通過血腦屏障，具有神經保護和神經營養作用，已廣泛應用于癡呆、腦卒中、腦外傷等引起的腦功能障礙治療，取得良好的臨床療效。本研究建立慢性低氧高二氧化碳大鼠模型，觀察施普善對其學習記憶功能障礙的治療作用及腦組織caspase-3蛋白表達的變化，并探討其可能的機制。

1 材料和方法

1.1 材料

常壓低氧高二氧化碳艙（溫州醫學院肺心病研究室研制），Medlab生物信號采集處理系統（南京美易科技有限公司），八臂迷宮（溫州醫學院神經藥理研究所），八臂迷宮飼餌（浙江大學醫學院藥學院），施普善（Cerebrolysin，奧地利Ebewe藥廠，批號608260），caspase-3 抗體（Cell Signaling Technology公司），GAPDH優質內參（上海康成生物工程有限公司）

1.2 動物分組和模型制備

清潔級SD大鼠（溫州醫學院實驗動物中心提供）44只，體重280～310 g，經八臂迷宮訓練淘汰12只。32只大鼠隨機均分為4組：①對照組；②慢性低氧高二氧化碳組（模型組）；③慢性低氧高二氧化碳施普善（1 mL/kg）干預組（施普善1 mL/kg組）；④慢性低氧高二氧化碳施普善（2.5 mL/kg）干預組（施普善2.5 mL/kg組）。后3組大鼠適應性飼養3 d后，置于常壓低氧高二氧化碳艙(氧濃度在9%～11%，二氧化碳濃度在5.5%～6.5%，艙內溫度23～26 ℃，濕度50%～70%)內，每天8 h，在入艙前半小時按規定劑量分別予以腹腔注射生理鹽水和施普善；其余16 h放置于正常環境中。每周6 d，連續4周。

1.3 行為學測試

八臂迷宮測試：訓練方法參照文獻[3]方法進行訓練，稱量自由攝食狀態下大鼠的體重，訓練前大鼠禁食1 d，其后限食1 d，使其體重降至原體重的85%左右，在整個訓練期間限食并維持原體重的85%左右。大鼠在迷宮中預適應2 d，每天1次，第1天在八個臂中均撒上餌片任其自由攝食餌片10 min，第2天在固定的四臂中散上餌片（1、2、4、7臂），任其在迷宮中尋找食物10 min。訓練時，在選定的（1、2、4、7）臂中放置餌片，該次序維持到訓練結束不變，將大鼠放于迷宮中央區，用小桶蓋住，在迷宮中適應15 s后提起小桶放出大鼠，大鼠可以自由選擇任意一臂攝取餌片。大鼠進入有餌片的臂并攝取了餌片為一次正確的選擇不做記錄，重新進入放餌片的臂稱為工作記憶錯誤（working memory error，WME），第一次進入不放餌片的臂稱為參考記憶錯誤（reference memory error，RME），兩者之和為總的記憶錯誤（total memory error，TE）。訓練成功的標準：連續5次訓練錯誤選擇次數為≤1次，同時WME必須為零。

1.4 caspase-3測定

大鼠斷頭處死，全腦取出置于冰盤上，依次取出皮層、海馬，去除腦膜和血管，迅速稱重后保存于液氮備用。取部分組織按1:10（密度:體積）加入細胞裂解液，冰上勻漿，13 000 g離心20 min收集上清液，BCA法測定蛋白濃度，等量蛋白(20～50μg)經12%SDS-PAGE電泳后，電轉移至PVDF膜上，5%脫脂奶粉TBST室溫封閉1 h；加入相應一抗（Caspase-3及內參抗體GAPDH，1:1 000）4 ℃孵育過夜，TBST洗膜3次；加入HRP標記的相應二抗（1:10 000）室溫搖床孵育1 h，TBST洗膜3次；ECL試劑作用5 min，X光膠片曝光。沖洗并掃描后結果用quality one軟件分析雜交條帶灰度值，以GAPDH水平為內對照。

1.5 統計學處理方法

組間比較采用單因素方差分析。

2 結果

2.1 各組八臂迷宮測試結果

與對照組比，模型組大鼠WME錯誤次數和TE明顯增多，差異有顯著性（P

2.2 各組海馬中caspase-3的表達

如圖2所示。與對照組比，模型組海馬中caspase-3的表達明顯增高，差異有顯著性（3.287±0.682 vs 0.523±0.131，P

3 討論

本實驗模型組大鼠的WME，TE的錯誤次數均明顯增加，而RME增加不明顯。可見，慢性低氧高二氧化碳模型大鼠有空間學習記憶和工作記憶能力受損，且以短時記憶受損為著，與臨床上COPD患者的表現相似。

既往研究[4]發現，施普善具有類似神經生長因子樣作用，可重建皮層微管相關蛋白水平，恢復神經元正常細胞骨架，增加海馬和皮層樹突分支和突觸密度，影響血腦屏障葡萄糖載體的表達，增加大腦葡萄糖運輸，改善神經元的能量代謝，從而發揮其神經營養活性。切除海馬穹隆傘造成學習記憶功能障礙的大鼠，給予施普善治療后，不僅改善記憶能力，而且改善獲得新信息的能力[5]。本實驗顯示，施普善干預組大鼠的TE，WME，RME錯誤次數較模型組明顯減少，認知功能明顯改善，提示1 mL/kg和2.5 mL/kg兩種劑量施普善具有快速改善慢性低氧高二氧化碳引起的認知功能障礙的作用。

動物實驗證實，慢性低氧可導致腦組織結構和功能的損害，細胞凋亡在其中起著重要作用。喻林升等[6]研究發現，與對照組相比，慢性低氧高二氧化碳模型大鼠腦微血管和神經元的超微結構發生改變，神經元變性、壞死和凋亡，海馬神經元的凋亡尤為明顯。徐浩等[7]實驗進一步證明，慢性低氧高二氧化碳可誘發大鼠海馬神經細胞凋亡。已有研究報道，大鼠學習記憶功能受損與海馬神經元的凋亡有密切關系[8]。Barhwal等[9]發現低氧環境中雄性Sprague Dawley大鼠水迷宮測試中工作記憶能力下降，海馬中凋亡蛋白如caspase-3表達明顯增高。本試驗發現模型組大鼠海馬的凋亡因子caspase-3表達顯著增強，而1 mL/kg和2.5 mL/kg兩種劑量施普善干預組大鼠海馬組織中caspase-3表達明顯下降。可見，慢性低氧高二氧化碳增加了大鼠海馬組織的細胞凋亡，而施普善的干預抑制了大鼠海馬組織的細胞凋亡，從而減輕海馬組織的損害。

Hartbauer等[10]采用低血清（2%胎牛血清）培養基的雞胚端腦神經元細胞應激模型，觀察施普善對神經元活性和程序性細胞死亡的影響，發現施普善治療后的培養基中神經元，凋亡相關的染色質改變顯著減少，證實腦施普善的肽類成分具有抗凋亡作用，從而發揮長期的神經保護效應。Yuan等[11]等研究表明，施普善可能通過調節細胞凋亡級聯反應，尤其通過caspase等因子的激活，從而引起細胞色素C釋放、Apaf-1復合體形成等發揮作用。當然，施普善對于海馬神經元抗凋亡的保護機制目前仍不清楚，有待進一步的研究證實。

參考文獻

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第2篇：大二學習計劃書范文

【摘要】 目的 觀察大蒜素對阿爾茨海默病(AD)小鼠學習記憶能力和腦組織抗氧化能力的影響。方法 采用 D半乳糖建立AD小鼠模型，大蒜素治療組在造模的同時皮下注射大蒜素。通過行為學方法，觀察大蒜素對AD小鼠記憶能力的影響;測定各組腦組織中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活性;常規HE和鍍銀改良法染色觀察小鼠海馬及皮質的形態學改變。結果 模型組與對照組、大蒜素治療組比較，小鼠記憶功能明顯減退，神經細胞破壞明顯，海馬和皮質出現β淀粉樣蛋白沉積及老年斑;大蒜素治療組和對照組的丙二醛(MDA)含量較模型組顯著降低(P

【關鍵詞】 大蒜素; 阿爾茨海默病; 行為學;抗氧化能力

大蒜素是大蒜的主要成分，具有抗腫瘤、抗氧化、抗血小板聚集、提高免疫、清除自由基、護肝、降血脂、降血壓及預防心血管疾病等生理學作用〔1〕。因其具有較好的脂溶性，可通過血腦屏障，因此在防治腦血管病方面的作用也備受關注。研究資料顯示，大蒜素可改善血液流變性、增加腦血流量、清除自由基、改善腦功能及減輕急性腦梗死時缺血再灌注損傷〔2〕。大蒜素作為一種具有良好發展前景的天然抗氧化藥物，具有抗氧化延緩衰老的作用〔3〕，同時對腦缺血再灌注大鼠海馬神經元具有保護作用〔4〕，而氧化應激和海馬神經元的損傷是阿爾茨海默病(AD)的主要發病機制。本研究采用D半乳糖致小鼠AD模型，從組織形態學角度，觀察大蒜素對AD腦組織的保護作用及對小鼠學習記憶能力的改善作用，并對其抗氧化機制進行初步研究，為臨床應用大蒜素防治AD提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 健康昆明雌性小鼠30只，清潔級，體重18～22 g，湖南長沙市開福區東創實驗動物服務部提供，批準號：001847。

1.2 藥品與試劑 大蒜素腸溶膠囊(20 mg/粒，湖北金龍福藥業有限公司，批號H42022592)，D半乳糖由國藥集團化學試劑有限公司提供(批號20050422)，兔抗P38 MAPK、SABC免疫組化試劑盒、DAB顯色試劑盒由武漢博士德有限公司提供，考馬斯亮蘭蛋白測定試劑盒、丙二醛(MDA)測定試劑盒及超氧化物歧化酶(SOD)測定試劑盒均由南京建成生物工程研究所提供。

1.3 主要儀器 BX51 系統顯微鏡(Olympus)、微量進樣器(上海安亭微量進樣器廠)、UV3100PC型紫外可見分光光度計(上海美譜達儀器有限公司)。

1.4 動物分組及造模 按照改良的Morris法對60只小鼠進行連續7 d Morris水迷宮定向航行訓練〔5〕。每天分上下午2個時段，每個時段訓練2次，并記錄小鼠從放入水槽至找到平臺的時間(逃避潛伏期)，若120 s仍找不到平臺，則由實驗者將小鼠放置于平臺上，逃避潛伏期記為120 s，并讓小鼠在平臺上休息30 s。根據訓練成績，選擇成績較好的30只小鼠。按體重分層隨機分成3組： AD模型組，大蒜素治療組，陰性對照組。每組10只。AD模型組與大蒜素治療組皮下注射12.5% D半乳糖40 μl，連續60 d。

1.5 給藥方法 大蒜素治療組在造模的同時按10 ml/kg進行腹腔注射大蒜素腸溶膠囊提取物0.48 g·kg-1·d-1;AD模型組和陰性對照組給予相同劑量的生理鹽水，連續60 d。

1.6 水迷宮行為學檢測 連續給藥60 d后，對小鼠進行改良的Morris水迷宮法檢測，記錄小鼠的逃避潛伏期，評價各組大鼠記憶能力的改變。

1.7 抗氧化活性檢測 行為學檢測結束后，用25%的烏拉坦麻醉小鼠后固定于自制的手術板上，置于解剖盤中，開胸暴露并游離心臟。切開右心房，經左心室插入灌流4℃生理鹽水20～30 ml，直至肝臟顏色轉白及右心房流出液澄清后，繼續灌注4%甲醛20～30 ml，取腦組織海馬部組織塊1 cm3 左右，4%甲醛浸泡固定24 h后，做石蠟組織切片。測定殘余腦組織重量，按重量體積比加4℃生理鹽水制成10%的組織勻漿，離心(2 500 r/min，10 min)，取上清液，置4℃備用。測定SOD 活力和MDA 含量。

1.8 組織形態的觀察 分別采用HE染色和鈴木神經組織鍍銀改良法〔6〕染色觀察小鼠海馬神經細胞及神經原纖維纏結(NET)。

1.9 統計學方法 數據用x±s表示，兩個樣本比較采用t檢驗，多個樣本均數比較采用單因素方差分析，所有統計由SPSS17.0軟件處理。

2 結 果

2.1 大蒜素AD模型小鼠學習記憶能力的影響 改良的Morris水迷宮記錄小鼠的潛伏期，實驗結果顯示，AD模型組小鼠的潛伏期(54.25±4.34) s，明顯長于大蒜素治療組(6.67±1.81) s和陰性對照組(12.18±3.94) s，差異有統計學意義(P0.05)。

2.2 MDA、SOD測定 大蒜素治療組和陰性對照組MDA 含量較AD模型組顯著降低(P

2.3 小鼠海馬區域切片HE染色和鈴木神經組織鍍銀改良法染色結果 HE染色結果顯示，AD模型組海馬區腦組織可見小膠質細胞增多，神經細胞數量減少，細胞散失，排列不成行，組織疏松;大蒜素治療組海馬區腦組織可見神經細胞普遍細長，細胞排列較規整;陰性對照組海馬區腦組織神經細胞排列整齊，少數細胞濃染，見圖1。鈴木神經組織鍍銀改良法染色結果示，模型組海馬區腦組織切片可清楚看到大量NET;大蒜素治療組海馬區腦組織切片錐體細胞顯示清晰，均未見到NET;對照組海馬區腦組織切片中錐體細胞顯示清楚，形態正常，未見NET，見圖2。表1 大蒜素對AD模型小鼠腦組織SOD活性和MDA 含量比較

3 討 論

AD是發生在老年期或老年前期的一種中樞神經系統慢性漸行性退行性疾病，以腦細胞內NFT 、細胞外老年斑(SP) 以及大量神經元丟失為主要病理特征〔7〕。國內外研究證實，自由基引起的氧化損傷是不同病因誘發神經退行性疾病的共同通路〔8〕。大量的自由基能夠損傷生物大分子使蛋白質、DNA和脂質過氧化，致使神經細胞凋亡和缺失，導致學習和記憶障礙，進而導致或加重AD。

大蒜素又名大蒜新素，化學名為二烯丙基三硫化物，其結構式為CH2=CH-CH-S-S-S-CH2-CH=CH2，是大蒜的主要有效成分。藤田勛等〔〕研究表明大蒜素的抗氧化活性部位是S(O)SCH2CH=CH2基團，其中烯丙基位的氫與抗氧化活性有關。有研究表明，大蒜素對小鼠局灶性腦缺血再灌注損傷有明顯保護作用〔9〕，其機制可能與提高抗氧化酶活性，抗脂質過氧化損傷及抗炎作用有關〔10〕。本研究表明大蒜素能改善AD模型小鼠學習能力和記憶功能，有效地清除腦組織過氧化代謝產物MDA，增強SOD的活性，提高了機體的抗氧化能力。因此，可以推斷大蒜素可以用來早期干預或預防AD，改善AD患者認知、記憶等臨床癥狀。

參考文獻

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8 Yves C.Oxidative stress and Alzheimer disease〔J〕.Am J Clin Nutr，2000;71(2)：6219.

第3篇：大二學習計劃書范文

2011年，在唐總的正確領導和大力支持下，在文浩、向勇、涂純敏三位經理的引導下，在技術部、售后服務部、前臺廖菲的配合下和組員及各同事的鼎力相助下，我快速的融入公司并且急速與公司同步成長成為前線工作人員。

2011年，在公司全方位的步入正規和本地易購網站（bendiyigou.com）日點擊率pv向5萬沖刺時，作為工作人員的我應該為公司盡一份微簿之力，因此特擬定以下幾點：

一、業務部的專業化服務

業務員的拉訂單的方式應該有所改變，不應該像以前那樣去做業務，我們應該更專業化，這個專業化我的建議是體現在這幾個方面：第一，與去訪客戶做交談之前一定要對客戶做全面而深入的了解，如果對客戶了解的甚少，那么在探討和溝通的時候就會又很大的問題，經常就會莫名其妙的丟失客戶；第二，我們應該知道客戶的問題所在，客戶的問題就是我們的希望，因為只要我們能幫助客戶解決他們所遇到的難題，客戶就有很大的可能和我們簽單，如有的客戶說以前也做過推廣但效果不好，我們就要清楚這個客戶是像要找一個推廣效果好的推廣商，那么我們就可以說出我們與其它的推廣不同的地方，而最重要的是要說明我們的推廣效果。讓他們信服我們一定能給他們帶來他們想要的結果；第三，業務員還應該對本地易購的產品和服務有更深入的了解，這樣業務員才能根據客戶的要求快速的向客戶推出公司相關的產品和服務；第四，業務員應該準時，守時，把客戶作為自己心目中的上帝。第五，帶新人學會如何找客戶？如何打電話？如何與客戶交談？如何介紹公司？如何專業的介紹業務？不能少于5次；特別是在電話營銷的時侯，一定讓主管當著新人的面給客戶打電話。讓新人學習該怎么說，說些什么。而且我們公司的經理基本都是從業務員做起的，都是非常優秀的業務員，他們比主管有更豐富的經驗。在帶新人的時侯，經理更應該教授新人如何做。

當然這些都是專業化服務的最基本的要求，其實還有很多需要業務員自己去整理和歸納，在這里作為我個人計劃的一部分像公司提出一些意見，希望公司越來越興旺。

二、公司的制度化管理

在2011年公司為了提高業務量并加強員工的管理，曾試著通過分組和拿提成的方法來提高員工的工作積極性和公司的業務量，但是實行一段時間后發現：組與組之間，成員與成員之間是提高彼此的積極性，然而后來我們又發現了一些不好的效果。成員之間因為業務的關系彼此之間的合作關系大大不如以前了。導致成員之間經常因一些小事而不和，而且最重要的是因為合作出了些問題，因此當然業務量的增加不如預先估計的那么好。顯然公司在管理層面上是有些問題的，世界500強的大公司之所以能做的比其他公司好，最主要的原因就是因為管理模式上比其他公司更勝一籌。而其中對業務員的管理更顯得重要，因為一個公司的銷售做的好，公司才有利可圖，而銷售又與業務員有至關重要的聯系。故我認為公司應該擬定一套層次化、責任制具有執行力的制度，并加強對業務員的培訓和管理。對這個制度我的看法是：首先應該把公司的員工劃分到各個部門，對每個部門來說，進行專業化的培訓，這樣分工明確公司的效率才會提高，而且各個部門應該設立一個負責人，負責各個部門的工作安排和人員調動。并每個月由負責人舉行各個部門的部門會議，并把討論結果和建議向唐總匯報，同時唐總只須下達指示和看其結果給予評價或者追究責任實行獎懲。還可以通過一些獎勵機制來提高員工的責任心和積極性，如全勤獎等。其次公司向前發展，就應該越來越細致了，不能還像剛成立那樣去經營，應該考慮的更細致，更專業了，這個細致和專業不是說說就算了的，重要的是讓客戶感受到，這樣才好吸引更多的客戶。因此，這就要我們大家一起探討我們的服務那里還有不足的地方。再次對于業務員來說，這個管理是最重要的，我的建議是業務員上崗之前應該對我們公司和服務有深刻的了解，因此之前一定要進行好培訓。應把一些業務做的好的員工作為帶頭人，帶領整個業務員隊伍的發展，可以讓他們傳授經驗，當然他們的作為帶頭人是業務精英，公司應該采取獎勵機制，這樣公司就會朝著業務精英的方向發展。總之，公司的發展一定要體現制度化和專業化了，到目前為止推廣效果基本上達到了預期的效果了，關鍵就在于公司服務的質量上了，也就是說人們都知道了本地易購，關鍵是人們對你的服務質量的認可了，所以重在提高服務的品質了。

三、技術部的熱忱服務

技術部主要負責給公司做網頁和提供網絡技術方面的處理工作，是公司的幕后英雄，有不可替代的作用。技術部在給客戶做網頁的時候經常會遇到客戶的反復的修改要求，在這里我們要知道客戶是上帝，我們應該盡量滿足客戶的要求，我們要不厭其煩，直到達到客戶滿意的效果為止，當然我們作為網頁方面的專業人員，有很多方面的知識客戶可能并不了解，對與客戶提出的無理要求，我們同樣要不厭其煩的向客戶解釋清楚，直到讓客戶知道這一切都是為了客戶好，只有這樣才能保證我們的客戶，同時也達到了一個很好的宣傳效果。

技術部的工作人員，在網站制作方面懶散，不管是什么樣的網站都應該同等對待，像網站小的話，應該按時按量的完成，直到客戶的認可和滿意。一個網站的制作到結束，技術部都沒有一個至始至終的人。總是喜歡脫脫拉拉，這樣的做法即給業務人員帶來很不滿的情緒。這樣即影響業績的發展，同時也給客戶帶來不好的效益和口碑。所以希望唐總好好給技術部工作人員分配一下工作，同時也為了整個公司的發展，因為技術部可是我們公司幕后最大的功臣。   1  

2011年業務員個人工作計劃相關：

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這些都是我對公司提出的一些小小的意見，這些意見出現在我的個人計劃書之中是要說明空洞的計劃書還不如寫一點建議，至少能給公司帶來一些實際作用。當然在2011年里我的計劃其實很簡單，首先就是我希望我所負責的工作都要出色完成，并更加積極的配合大家一起把公司的業務搞上去；其次就是我要更好的提升自己，多學一些與公司發展有關的知識；再次就是我要改正自己在工作中做的不好的地方，并希望得到同事的批評和指正；最后就是我要和同事和睦相處，互相配合。真心的祝愿我們的公司在唐總的領導下越來越紅火。

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