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內部認購精選(九篇)

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第1篇:內部認購范文

1.1企業建設缺乏以人為本的觀念

企業建設中,企業文化是促進企業發展的重要內容,人力資源管理沒有從真正意義上對專業人才管理引起重視,無法明確“以人為本”的企業文化理念,以企業領導決策為主,忽視了盡量保持企業領導層與內部員工層的平等,導致一些階級觀念的出現,不利于企業全體員工之間的團結協作,難以形成企業和諧的共同進步。

1.2企業人力資源管理機制有待完善

當前,很多煤炭企業的人力資源管理一直沿用傳統的管理機制和理念,沒有將人力資源管理進行全面詮釋,只是簡單進行人才的配置管理,并沒有對人才進行充分的重視利用,缺少專業素質的激勵和培養,局限人才的價值發揮,造成不必要的人力資源浪費。管理機制的不完善,無法調動員工的工作積極性,不利于企業的發展。在人才配置上,受到傳統思想觀念的影響,沒有根據人才素質特點與企業崗位需求進行匹配,錄用的技術人才的水平不高,企業需要的高素質復合型人才更是屈指可數,人力資源規劃和配置的不全面導致企業整體水平一般,不利于企業的長期發展。

1.3企業薪酬分配機制缺少創新

很多的煤炭企業在進行薪酬計算時,都采用定崗定薪制,這種薪酬核算的方式容易導致一些不好的現象出現,例如看人定薪、看學歷定薪等,不利于員工實際價值的體現。另外,缺乏績效考核機制的創新,企業評價員工的績效沒有制定規范的標準,主觀地根據印象或經驗表現進行績效考核,還可能出現績效多少和員工與領導的關系有關等現象,不利于對企業員工的激勵,也無法實現績效考核的真正目的。

2人力資源管理的重要性

首先,企業人才管理方面。人力資源管理可以實現人才的合理分配、利用和管理,維護企業內部員工之間的關系,促進彼此的溝通和交流,保證企業人才的價值充分發揮效果。其次,企業人才績效方面。科學的人力資源管理可以創造良好的企業氛圍,合理安排人力資源,保證人才價值得以實現,還能促進員工的積極開拓創造性,不斷提升工作效率,實現個人績效的提高。最后,企業發展方面。企業的發展離不開人才的貢獻,科學的人力資源管理會完善優秀的組織體系,通過恰當的員工布置,提供員工創造價值的平臺,共同協作,可以為企業創造巨大的財富,促進煤炭企業可持續發展。

3煤炭企業人力資源管理的改進措施

3.1重視企業文化建設理念

企業文化建設是企業發展的價值觀體現,對員工的行為和思想都有良好的指導和規范作用,將“以人為本”的理念加以重視,通過加強宣講,將人本思想在企業內部進行有效灌輸,將理論思想運用到企業發展的建設中。只有加強人本思想建設,企業才能營造一種和諧、友好、團結的文化氛圍,不斷培養、完善企業員工的基礎意識,尊重員工的思想和態度,將企業團隊意識、協作意識進行關注,充分發揮企業對人才的重視和培養,在人力資源管理的幫助下,讓員工更好的為企業創造發展。

3.2創新并完善企業人力資源管理模式

人力資源的管理制度要進行創新,要摒棄傳統的管理模式,順應社會發展的需求,提高企業管理的辦事效率。在人才的錄用方面,煤炭企業要樹立公平公正的招聘選拔機制,嚴格根據企業實際需要,擴大招聘渠道,不斷選拔更多綜合型技術人才為企業所用,保證企業人力資源的充沛。另外,加強企業內部現有技術人員的培訓和教育提升工作,通過舉辦各種學習交流會、技術培訓等,完善企業技術人員的素質與技術,壯大企業人才建設隊伍,為企業的進步和發展創造可靠保障。在進行企業人力資源規劃時,要綜合考慮企業發展現狀,判斷企業需要的技術人才,合理配置崗位需求,實現技術人才的價值,制定具有戰略發展意識的長久規劃,為保障企業可持續發展而進行人力資源儲備和管理。

3.3加強人力資源管理的考核以及薪資結算機制

煤炭企業的績效考核要以保障技術人員的基本利益、不斷實現自我提升和突破為前提,制定公平、公正、標準的考核機制以及有發展性的薪酬結算機制,激勵員工積極、自主地創造績效,也要制定相應的處罰規則,監督員工的工作效率,實現企業員工的共同進步,避免不求上進。創新企業薪資結算機制,在公平、公正的基礎上,按照崗位和技能的不同制定薪資分配標準,拓展多元化的薪資待遇,對員工的福利方面要有相應的保障,如醫療、保險等,激勵員工向上,創造更多的企業效益。

3.4健全企業人才培訓體系

要加強企業的人才競爭實力,就要不斷健全企業的人才培訓體系。企業培訓機制不僅僅是要對技術人員的實際操作和理論知識進行培訓,還要從日常生活中注重人才能力狀態的了解,培訓內容要進行針對性的設計,根據員工不同的水平狀態和學習能力進行不同的教學培訓課件的制定,保證培訓機制的多樣性,真正實現培訓的價值。另外,要不斷注重人才能力的培養和重視,避免人才的流失,增強企業綜合實力。

4結束語

第2篇:內部認購范文

[關鍵詞] 法人治理結構 內部審計

一、法人治理結構的概念和組成

公司作為法人,需要有相適應的組織體制和管理機構,使之具有決策能力、管理能力,行使權利,承擔責任。這種體制和機構被稱為法人治理結構,也可以稱之為公司內部管理體制。這種結構使公司法人能有效的活動起來,因而很重要,是公司制度的核心。按照《公司法》規定,法人治理結構有四個部分組成:

1.股東會或股東大會,由公司股東組成,所體現的是所有者對公司的最終所有權;

2.董事會,由公司股東大會選舉產生,對公司的發展目標和重大經營活動作出決策,維護出資人的權益;

3.監事會,是公司的監督機構,對公司的財務、董事和經營者的行為發揮監督作用;

4.經理,由董事會聘任,是經營者、執行者。

二、我國法人治理結構的缺陷

1.股東大會職權流于形式

《公司法》規定了股東大會是公司最高的權力機構,并列舉了11項職權。但實際權力往往操縱在董事會和經營管理者手中。這主要源于兩點:第一,隨著公司股權結構的高度分散化,股份公司特別是上市的股份公司的大部分股權仍由政府持有,國有股和法人股占了全部股權的絕大部分,股權結構失衡。第二,公司經營活動的日益專業化和復雜化,更加需要專業人員進行決策和組織經營活動。為了不降低效率,利于公司對市場機遇做出敏捷反應,在公司組織機構的權力分配上,經營決策權逐漸轉移至董事會。

2.經理階層職權膨脹,缺乏健全的人力資本激勵機制

公司經理是是由董事會聘任的,經理階層在生產經營中往往享有比董事會更具體,更廣泛的權利。因此高級經理人員的好壞決定了公司的成敗。從經理人員的角度看,如果他們的薪酬只是基本工資和對已完成業績的年度獎勵,他們勢必只追求短期的利益,若要使其為公司長遠發展考慮,就必須有相應的激勵手段。而現在的經理薪酬制度,要么不能恰當地估計和確認經理人員的貢獻引發優秀企業家流失現象,要么經營者自定高額薪酬,經理人員實行自我激勵。在企業產權缺位的情況下,這樣易造成把國有資產無償量化給個人等損害小股東利益的行為。

3.監事會監督職能不能到位

隨著公司規模和公開程度不斷擴大,監事會職權的重要性也日益遞增。雖然我國《公司法》規定了監事會擁有對董事和經理違法行為的制止權和提議召開臨時股東大會的權利,但沒有創設監事會履行職責的程序性保障機制,《公司法》也沒有作進一步的規定。監督流于形式缺乏力度和威懾力,難以對董事會和經理層形成有效的監督制約。

因此要完善我國的公司治理結構,應當處理好股東大會、董事會、監事會和高級管理層的機構設置和職能界限。而加強公司內部審計工作,無疑會完善風險管理和內部控制機制,強化資本約束,建立有效的法人治理結構。

三、內部審計的定義和強化措施

1.內部審計的概念

內部審計是一項獨立、客觀的保證和咨詢活動,它通過系統化和規范化的方法、評價和改進風險管理、控制的有效性,幫助組織實現目標。由于內部審計人員熟悉企業經營環境并了解企業經濟活動及過程。有效的內部審計可以充分發揮強有力的監督功能,達到完善法人治理結構的目的,保證企業整體利益的實現。

2.強化內部審計的策略

(1)轉變觀念提高認識,加強內部審計工作。作為企業高層領導應從管理的角度充分認識到內部審計在企業管理中的重要性,為內部審計配置適宜的人力、技術、資源,提高內部審計機構和內部審計人員的地位,充分調動內部審計人員的工作熱情。作為內部審計部門,也應按照高級管理層和董事會所確定的政策認真履行其職責。及時將審計中發現的經營管理中存在的薄弱環節向直接領導匯報,并提出合理化建議,從而贏得企業管理當局的重視和信賴,以保障審計權利和職責的有效執行。

(2)保障企業內部審計的獨立性。要使內部審計真正起到監督經營者資本營運、維護資產安全完整、達到協助管理當局有效地履行職責和責任,就必須明確產權主體,建立產權監督體制,將內部審計置于產權主體的領導之下,代表產權主體的利益進行工作,增強內部審計的權威性、獨立性,改變以往內審無力的現象。當前世界各國設置的內部審計機構的組織模式中以董事會領導型、監事會領導型的內部審計機構,相對來說有較強的獨立性和權威性,為現代企業內部審計較為理想的機構模式。

(3)加強企業內部審計人員隊伍建設,不斷提高企業內部審計人員的素質。要將實踐經驗豐富、業務水平較高的人員充實到內部審計隊伍中。加強對內審人員的后續教育工作,使內審人員及時更新知識,掌握新的技能和方法,使企業內審人員成為既懂財務會計、熟悉審計業務,又具備經營管理、經濟法律等各方面知識的復合型人才,從而建立一支知識結構多元化、專業知識技能化、技術職稱資格化的企業內部審計專業隊伍,提高企業內部審計工作質量。

隨著現代企業經營管理水平的提高,企業內部審計應沖破制約作用的范圍,擴展到促進企業改善經營管理和提高盈利水平等作用的方面,通過評價企業組織內部的控制,揭示企業內部存在的潛在風險,完善公司治理結構,確保企業高效地運作和發展。

參考文獻:

[1]何軍:我國上市公司治理結構存在的主要問題與法律對策.四川職業技術學院學報,2006年第5期

[2]馬韶青:我國公司治理結構的法律探討.六盤水師范專科學校學報,2007年第2期

第3篇:內部認購范文

關鍵詞:視知覺;空間;細部;色彩

Abstract:There is a correlative system within human, object and enviornment with the modern society's transition to pluralization. Architects ought to reconsider about all kinds of enviornments from humanistic point of view. We must re-explore the relationship between human and space and improve our works with a systemic viewpoint.

Keywords:visual perception; space; detail;color

中圖分類號:TU-80; U45

文獻標識碼:A

文章編號:1008-0422(2008)11-0101-02

1引言

建筑是視覺感知的藝術,建筑師在設計過程中,始終伴隨著視覺思維。大腦通過外界的光信號在人的視網膜上反映的顏色和色塊集合,知覺到排列有序的由分離物體組成的視覺世界形成了視知覺,各種不同的物體占據不同的位置,存在著相互作用或相對運動。實體與周圍的關系,實體本身的形狀、質感和色彩是產生視知覺的幾個主要方面。就建筑而言,從古至今,無論是東方還是西方,經歷了許多的主義更替,回歸本質,是建筑實體與外部空間的協調、內部空間的平衡,建筑實體本身點、線、面等的細部勾勒和色彩及材料帶來的變化。

2新特點

新一輪上海市城市總體規劃提出構筑國際大都市綜合交通體系,上海市城市交通白皮書提出構筑國際大都市一體化交通,以優質、高效、整合的巨型交通體系,適應不斷增長的交通需求,全面提升城市綜合競爭力。作為城市道路延伸的越江隧道亦為上海城市交通的一個組成部分,從最早的打浦路隧道至今,已經歷了半個多世紀的發展。隨著現代主義潮流的到來,材料的不斷更新,建造技術的不斷發展,使得越江隧道不再以單一的連通上海黃浦江兩岸的交通功能為主了,以人為本的人性化思想滲透到生活的每個角落;怎樣最大限度地利用建筑手法通過對空間和細部等的處理來解決機動車在經過越江隧道時所形成的單調、乏味的視覺感受亦成了新時期的新課題。

3簡述

隧道為狹長的圓形及方形管狀結構,由相似的橫截面不斷地有序重復出現形成了隧道的三維空間。由此把隧道空間與人聯系起來的是人的視覺對其各個連續截面的空間尺度及其細部的感知。典型的越江隧道橫截面:其頂部為檢測電纜、照明及縱向通風空間,上部為行車空間,下部主要為逃生及各管線穿越空間。撇去其下部,當機動車以一定的速率經過時,由頂部、側邊以及前方路面構成了隧道的三維空間與機動車的行駛速度形成了司機的四維動態視知覺。因此要改變作為隧道客體的機動車司機的視覺感受,就要從隧道的空間、細部、材料的色彩和光感等著手。

4實例

4.1 簡介

南路越江隧道位于上海南浦大橋和盧浦大橋之間,主線北起浦西南路、中山南路路口;沿東南方向穿越黃浦江至浦東的高科西路、云蓮路口,隧道全長約2.67km。規劃為雙孔,每孔為單向雙車道,計算行車速度為40km/h,行車凈高為4.5m,凈寬為7.5m。

4.1設計的構思要點

南路越江隧道是黃浦江上第八條隧道,位于世博園區規劃區域內,作為2010年世博會期間連接浦江兩岸世博會場館的專用越江通道,將滿足園區內每小時六到七萬人次的越江需求,世博會后將向社會開放。上海世博會將是探討人類城市生活的盛會,屆時南路越江隧道將作為盛會的主要迎賓廊之一。這條長廊將要介紹的是新技術、新概念,展現的是這個時代的速度感、科技感,營造是以人為本的切身感受。

4.1.1 空間

隧道內部由兩種基本的空間組成:車行空間和功能空間,表現為豎向分層狀,其上、中、下部分別為縱向通風空間、車行空間、管線通道;車行空間是人形成思維和活動的虛體空間,以車輛通行限界來描述,當人置身于其中時,關注的是隧道的另外一個空間:即功能空間。“空間”的概念:源自于拉丁文的“spatium”“在日常三維場所的生活體驗中、符合特定幾何環境的一組元素或地點;兩地點間的距離或特定邊界間的虛體區域”(見American Heritage詞典)。空間的感知涉及了空間的特定構成方式,因此成就人在隧道內的視覺感知,是那部分被結構外殼和車輛限界限定了的功能空間中各流線、關系、尺度等的組織。南路隧道盾構段的典型橫剖面,其上部空間由于特殊的圓形盾構結構,決定了其與結構邊界形成的是拱頂狀,拱頂弧線頂點與車輛限界相距2m有余,成為各功能的必爭之地,南路隧道采用的是全新的橫向排煙與縱向通風結合的形式,最初的方案是在頂部預留一部分空間作為橫向排煙通道,用預制鋼筋混凝土板相隔并作為行車空間的吊頂,每隔一定距離頂部開啟排煙百葉窗收集煙霧,再于混凝土板下剩余的功能空間中布置傳輸電纜、照明、監控及通風設備,隧道下部空間則作為管線通廊等;各功能各就其位,也提高了空間利用率,但卻忽視了最重要的車行空間中人的使用感受;早期的隧道由于拱頂耐火材料的限制,在其頂部加設預制混凝土板做為吊頂以保護的維護結構,隨著拱頂耐火覆蓋材料的發展,對拱頂做了全新的布置,去掉了累贅的混凝土天花板;如今這道吊頂又回來了,使得有限的隧道內部空間顯得局促狹小,違背了世界發展的客觀規律和以人為本的設計初衷。為了優化人的視覺感受,經過一系列研究和探討,對隧道橫截面各功能空間做了新的排列組合,把原先位于頂部的排煙通道移至隧道下部的一側空間,在不影響車輛限界的前提下,通過側邊引至頂部的通風管道收集火災工況下積聚在頂部的大量煙霧,整合下部以傳輸為主的各功能管線,緊湊的布置在隧道下部的另外一側空間,而拱頂部分的功能空間僅有序設置一些必要的設備,這樣一來,立即改變了原本比較壓抑的寬扁型隧道內部空間的心里感受,給人帶來比例和諧的寬敞型視覺享受。

4.1.2細部

細部是建筑的生命:從構件尺寸、結構邏輯、材料肌理和質感,到構造細節的處理,都表達著其所構成整體的情感、氣質和內涵。隧道內部的細部不同于普通建筑,它不在于門、窗、入口、欄桿等的處理,從其斷面可以看出,從拱頂的喇叭、照明燈、內墻面……到防撞側石、底部的排水溝,其間每個設備每個功能構造都是它的細部。由此可見,隧道內部的細部是功能與結構的聯接構件,處于不同功能和結構部位以及不同形態部位的連接處,呈水平狀向前延伸,而要改變它所包含的視覺信息,就要從這些“細枝末節”做起。

“希臘建筑如燦爛的、陽光照耀的白晝,伊斯蘭建筑如星光閃爍的黃昏,哥特建筑則像朝霞。”每種形式的細部語言賦予建筑不同的情感;對于現在,簡潔的處理手法、純凈的體型、新興的材料是這個時代建筑的主要特征,于是形成了運用高技派和極少主義或者稱最簡單派藝術相結合的現代手法對隧道內部細部進行處理的想法。

高技派表述的是使工業結構、工業構造和機械部件具有的美學價值,突出當代的技術特色,表達高科技是社會發展的動力;在隧道的拱頂,射流風機、車道信號燈、檢測電纜、廣播喇叭等各種技術設備,不加遮攔的布置在結構內表面;正體現了高技派的特征,精細的拉桿、輕巧簡潔的鋼構支起各種機械設備、數字信息面板,立時帶來具有機械美、高科技美的未來視覺感受。

隧道側壁的裝飾板是保護隧道側面結構的重要構造措施,它與司機的視線呈同一水平層,人的視知覺大部分都來自于它,同時為了保證隧道內部交通順暢安全,減少司機的視覺干擾,提出了極少主義表皮的現代主義建筑手法。極少主義是現代主義的重要流派,是一件作品去掉非本質元素,所有細節和連接濃縮至精華,所散發出來的完美感。于是,構思了用鋁―鋅波形板作為隧道的防護裝飾板,鋁―鋅波形板不僅有優異的諸多性能,而且具有華麗的表面;加上在鋁―鋅波形板中部局部穿孔,形成朦朧的光帶,隨著機動車的前進,淡淡的光暈和波形板材重復的起伏形成不斷變換的視覺效果,既重復又絕不單調,將我們帶入探討未來的世博盛會。

4.1.3色彩與燈光

色彩的出現是由于光照射到物體上,物體對光不同反射的結果。物體本身固有的顏色,即物體色,光的色彩是光源色。物體的色彩是光源色和物體固有的顏色相互作用的結果。物體本身的質感也影響著物體的色彩,比如物體表面的光滑和粗糙對光的吸收程度不同。

人生活在這彩色的世界里,不斷與自然融合、不斷改造自然,在這個過程中逐漸認識色彩,發展到有意識地運用色彩改造生活,建筑的發展也一直伴隨著色彩的應用。

色彩令世界變得繽紛,影響著人們的心境,人在與色彩相遇的那一瞬間,意會到或平和、或熱誠、或清新…如何最終改造為人性化的隧道內部空間,色彩和燈光是最后的點睛一筆。

隧道的色彩區域大致分為三塊:頂部、側壁及路面。

隧道的頂部對于司機來說是整體視覺的背景,采用無色彩的黑色防火涂料較適合;黑色為退色,就象夜空,給人以鎮靜、收縮、遙遠的感覺,涂料表面粗糙,吸收較多光源,反射低,這樣給予了隧道內部空間無限放大的錯覺,從而減少穿越隧道時的壓抑感。

隧道的側壁是司機的主要視覺區域,既不能降低照明也不能過于刺眼,因此微泛藍青的白色系列較為合適,當燈光照在亮麗的銀白色金屬板上時,隱隱漫出的藍青色給人以干凈、透明、智慧的感受,激勵著人的情緒,有助于保持司機的注意力。

隧道的路面為司機指名去向,其視知覺取決于隧道內部燈的照度在路面所形成的顯色指數。

第4篇:內部認購范文

關鍵詞:內部營銷;人力資源管理;模型

一、內部營銷的內涵

內部營銷的定義最早是由美國的Berry 和 Parasuraman兩位學者提出,兩人將市場營銷理論植入企業內部的人員管理之中,認為內部營銷是一個內部供應者向內部顧客提供完善服務方案的過程。[1]Geroge(1990)認為這種哲學要求企業的管理者將雇員視為消費者來滿足。[2]Berry 和 Parasuramen(1991)認為這種營銷職能是設計出滿足雇員物質和精神需求的工作產品使雇員可以從中得到滿足進而更好的達成讓消費者滿意的企業目標。通過對以往內部營銷內涵回顧的分析可以看出,作為人力資源管理工具的內部營銷,其理論的實質就是用營銷的視角和觀點對企業內部的員工進行規范和管理,通過對STP策略和

4P策略等營銷策略的有效運用來逐步提升企業內部員工的滿意度和服務質量進而實現使消費者滿意的企業目標。

二、運用內部營銷理論指導人力資源管理工作的可行性

將內部營銷理論引入到人力資源管理活動中的可行性有以下兩個方面:一方面企業之所以開展人力資源管理活動是為了挑選符合組織業務發展需要的人才,進而提升他們工作的積極性的和潛能的發揮以實現企業利潤的獲得和目標的達成,而內部營銷的開展則是通過企業對員工讓渡價值的增加而和員工之間構建起來的和諧長久的關系已達到企業做種目的的實現,兩者都是借助對員工管理和激勵的完善來實現企業的最終目標的;另一方面人力資源管理職能整合需要借助內部營銷的有效實施,這是因為內部營銷是在企業將員工視為內部顧客基礎上將外部營銷理論應用于企業內部的經營管理之中,由STP策略充分了解到內部顧客的具體需求和潛在需求,再通過4P策略針對性的提升企業內部顧客的滿意度,進而解決人力資源管理中存在的各種問題。

三、服務業人力資源管理中存在的問題

(一)人崗不匹配現象導致企業冗員與缺員并存。有關服務業的準確定義一直是國內外學者熱議的話題,在查閱相關文獻的基礎上本文認為服務業是指生產和銷售服務產品的生產部門和企業的集合。在服務行業中員工在很大程度上影響著企業創造的經濟效益,但在目前的企業當中一線員工緊缺、二線員工松散、三線員工臃腫的現象比比皆是,這就要求企業將人力資源管理同企業的戰略目標結合在一起,來為企業創造核心的競爭優勢,但是由于企業的高級管理層缺乏對人力資源管理過程中整體規劃的有效掌控,使得公司對工作的管理呈現出混亂的狀態。與此同時,企業內部的員工無法感知到組織對自身職業發展的關注和培養,認為高層管理者僅僅是將雇員當做企業獲得經濟效益的工具,無法自發的形成對組織的歸屬感,因而造成職員的離職率逐年的升高,這一現象尤其體現在環境艱苦、壓力巨大的一線員工身上,員工滿意度的下滑直接或間接的導致企業服務質量的下降,使之陷入服務失敗循環當中。

(二)培訓體系僵化,不能滿足員工需求。企業的經營目標是通過消費者滿意度的提升獲取經濟利益,因此其人力資源部門組織的員工培訓都是以企業的任務為出發點,常常忽視員工個人職業發展和提升的需求。以此,企業以自身需求為出發點構建的培訓體系十分的不完善,培訓課程的設計不僅不符合員工的實際需求,而且都是注重其帶給企業的短期經濟效益,忽視了開發員工的潛能和團隊、質量、服務意識以及對他們思維和觀念的培訓等服務行業內員工所應該具有的特質。這種忽視企業內部擁有技術專長潛能員工的開發,反而耗用更多的資源停留在員工短期崗位培訓和一般管理理論知識的層面,使得企業無法使得自身的培訓體系將組織內部人力和資源等所有要素整合成一個有機體,構建成一個完善的需求、培訓和改進的良好循環體,通過員工能力的不斷提升來打造企業的核心競爭能力。

(三)溝通不良導致企業內部流動率低與員工離職率高并

存。企業的人力資源管理部門雖然從事的是有關人事的管理工作,但卻沒有將組織內部的員工放在與外部顧客同等重要的位置,而是在將“事”作為企業經營管理過程中核心部分的基礎上構建一套強調工作任務重要程度的管理機制,不僅忽視組織中不同成員需求的差異性,而且缺乏渠道獲取和了解組織內部成員的需求,因而擱置了對職員理解和溝通機制的構建。這種傳統固有模式的不知變通不僅阻礙了組織成員流通意識的形成和流通通道的設立,而且因無法有效滿足組織內部成員個性化的需求及通過制度、獎懲等手段束縛其發展而導致員工滿意度的降低,使得企業內部員工的流通率極低且員工離職率呈現逐漸升高的趨勢。

四、構建服務業人力資源管理內部營銷模型

(一)服務業人力資源管理中的 STP 策略。首先,企業的人力資源管理部門將內部員工分成具有類似需求的多個群體,并將這些具有差異性的群體作為內部營銷的對象;然后,內部營銷的實施者在市場調研的基礎上對企業現有員工、潛在員工和離職員工進行分析,歸納總結針對每組研究對象不同特征的具有客觀性和真實性的信息資料,并根據企業的發展目標和整體資源情況選擇符合企業未來發展規劃的細分市場作為企業的主要市場;最后,企業的高層管理者要以企業發展的最終目標和工作需要來對員工進行一系列的選擇、培訓和考核,使得不僅員工的能力足以符合工作崗位的要求,而且崗位的特征可以與員工的興趣相對應,除此之外,企業文化和員工價值觀的一致性等也是十分重要的考略因素,這種人盡其才、人崗匹配的內部市場定位策略在很大程度上滿足了內部顧客的需求,同時也避免了造成企業資源的浪費。

(二)服務業人力資源管理內部營銷模式中的產品策略。企業將工作崗位和與之相關的各種利益結合體作為企業“銷售”給內部顧客的產品,并根據內部顧客需求的差異性設計和開發出薪酬產品、職業發展產品和企業文化產品等多種以追求顧客滿意的產品形式,如對于處于企業基層的員工應該設計成成包含基本工資、績效薪酬、獎金和福利四個部分在內的以薪酬為核心的體系,并且根據工作年限的長短分為收入具有彈性和較為穩定兩種;針對企業的中層員工來說,他們追求的是個人工作方便的發展,因此以職業發展為核心的工作崗位設計可以激發他們對于工作的積極性和熱情;除以上兩種薪酬體系的設計外,企業文化對于員工的吸引力也是不容忽視的,當員工的價值觀和企業愿景相符合時員工更容易自發的認同和理解企業文化,因此以企業文化為核心的薪酬設計是十分必要的。

(三)服務業人力資源管理內部營銷模式中的價格策略。企業的內部營銷中,價格策略通常指的是“銷售”給內部顧客產品的價格,即員工付出辛勞完成工作任務應獲得的報酬,因此合理的薪酬體系的設計關系著員工工作的積極性和滿意度。其中,企業的內部營銷一般有三種定價方法:成本導向定價指的是以員工的工作年限和經驗的豐富程度作為薪酬設計的制定依據,并根據員工對付出貢獻的多少對薪酬做出相應的調整;顧客導向定價指的是以企業內部顧客的感知價值為出發點將員工評判組織提品所具有的價值作為薪酬設計的參考依據,這要求企業事先調查和了解員工的各種需求和其對企業提品價值的感知度;競爭導向定價指的是以同一地區相同行業的薪酬設計作為定價的評判依據,企業可根據內部人力資源需求緩急的程度或低或高于市場上的價格基準從而進行進一步的控制和調整。

(四)服務業人力資源管理內部營銷模式中的渠道策略。企業在實施內部分銷策略時將其自身作為生產者,與此同時各個部門管理者作為生產者與內部顧客之間的中間商,其中人力資源管理部門作為中間商,通過中間商在生產者和內部顧客之間的調整和協助以最終實現將組織產品及相關信息傳達給內部顧客的同時獲得反饋,這種溝通渠道的設計可以通過對各部門管理者的評估和激勵實現信息的有效溝通。針對企業在實施內部營銷的過程中時常遇到障礙,為此企業應該采用有效的激勵方式管理和敦促各部門負責人成為企業和員工之間稱職的渠道連接者,或是將這些渠道成員的行為通過評估標準的考核將結果與其薪酬掛鉤,使得中間商可以充分的發揮其在生產者和內部顧客之間的連接作用,讓企業內部營銷的渠道策略得以順利的實施。

(五)服務業人力資源管理內部營銷模式中的促銷策略。企業作為內部營銷的實施者一般通過溝通、培訓、激勵、授權四種方式的有效運用促使內部顧客對企業提供的產品達到滿意。其中,溝通意在使企業、部門和員工相互之間通過多方位和多角度的不同的溝通渠道將重要信息充分有效的傳達;培訓的作用主要是將企業的內部營銷思想和服務意識灌輸給組織內部的員工,這不僅需要企業的培訓內容包括對工作技能和規范的相關培訓,還要求對企業核心價值觀和內部部門運作等知識的普及;激勵主要注意的是既要和企業的發展目標相結合,還要將員工的需求放在重中之重,因人而異的運用具有差異性的激勵手段;授權即是給予員工一定的職權,規定授權的范圍、對象和程度并加以監督和管理,通過讓員工充分感受自主解決困難完成工作的成就感和滿足自身職業發展的需求來實現提升員工的積極性和滿意度的目的。

參考文獻:

第5篇:內部認購范文

【摘要】 [目的]探索應用計算機處理人體正中神經全長連續冰凍組織切片的二維圖像信息,開發3DNerve神經三維可視化系統,重建人體正中神經內部顯微結構并實現三維可視化。[方法]取新鮮人尸正中神經標本1例,以人長發為定位線、OCT包埋劑包埋、采用連續冰凍組織切片、乙酰膽堿脂酶組織化學法染色、高分辨率掃描儀獲取二維數碼信息后、應用3DNerve對正中神經顯微結構進行三維重建。[結果]正中神經在不同斷面神經束的數目、位置以及神經束內神經纖維的性質變化較大。連續斷面觀察顯示各神經束均是混合束,未見有純粹的感覺束或運動束的出現。通過3D Nerve可在任意斷面放大的視野下觀察正中神經的顯微結構,追蹤各神經束在正中神經內的立體行徑。從而動態地展示正中神經內部神經束的復雜結構。[結論]重建的正中神經三維可視化真實地再現正中神經干全長及其內部各神經束和束組的三維立體結構,可為臨床修復正中神經損傷提供精確的斷層解剖圖像。

【關鍵詞】 正中神經; 三維重建; 三維可視化; 乙酰膽堿脂酶

Abstract:[Objective]To explore the application of computer in dealing with twodimensional image information of human median nerve series freezing tissue sections, in order to develop nerve threedimensional visualization system (3D Nerve) , and finally to reconstruct 3D internal microstructure of human median nerve and realize 3D visualization.[Method]One fresh cadaver median nerve was taken, located with human hair and embedded in OCT. Series freezing tissue sections were made and stained with ACHE histochemistry method, and 2D image information was obtained through high resolution scanner. Microstructure of median nerve was finally reconstructed with 3D Nerve.[Result]Different cross sections of median nerve had quite different number and positions of fasciculi. In addition, characters of fasciculus' s internal nerve fiber were also quite different.Scross sections observation showed that all fasciculi were mixed fasciculi. With the 3D Nerve, the microstructure of median nerve was able to be observed in magnifying visual field at any cross section, and the tracking of stereo course of fasciculi in median nerve became possible.[Conclusion]Reconstructed 3D visualization can reveal the whole microstructure of median nerve and the three dimensional stereostructure of fasciculi and fasciculus groups exactly and truly. It can provide exact topographic atlas and facilitate precise clixical repair of median nerve injury.

Key words:median nerve; threedimensional reconstruction; threedimensional visualization; acetylcholinesterase

盡管顯微外科技術不斷進步,正中神經損傷后修復的結果仍然難以預料和滿意。其中重要原因是不能分辨運動和感覺神經束支[1]。由于神經纖維不是始終沿著某一神經束行走,而是在束間互相穿插移行,呈叢狀反復交叉,使神經束的大小、數目和位置不斷發生變化。因此迫切需要一個精確真實的正中神經內部顯微結構的三維立體圖譜。

目前正中神經顯微結構的三維重建研究國內外報道均極少。1945年Sunderland[2]通過大體解剖學和組織學方法描述了神經內部結構復雜的束型變化,并繪制了神經斷面的二維分布圖。據Sunderland的研究,甚至相距0.8 mm,神經的局部排列已有差異。1980年Jabaley[3]描繪出正中神經遠端的一幅三維概念圖,發現在正中神經的遠端,束型在較長段內保持穩定。1984年Terzis[4]在實體解剖和組織學切片的基礎上建立了正中神經的三維模型。1991年Greg P.Watchmaker[5]等對前臂遠段及手部的正中神經進行連續組織切片邢染色后,應用開發的軟件進行圖像識別和統計處理并通過三維構建的方法進行了神經束交錯變化特征的研究。但是這些以結構研究為目的的三維構建仍然缺乏臨床的實用性。2006年Meek MF[6]等采用磁共振DTI技術來重建在體正中神經,但其只能顯示正中神經主干的走形,無法更進一步顯示正中神經內部結構的顯微圖像。

本研究基于正中神經連續冰凍組織切片的二維圖像信息,制備成正中神經從其起始處到腕部連續的染色前、后神經斷面的二維圖像信息數據庫,并根據該數據庫實現了一個具備神經三維可視化全套功能的3D Nerve神經三維可視化軟件系統,逼真地重現了包括正中神經結構信息的三維立體圖譜,為臨床上正中神經損傷修復方式的選擇提供有益幫助,同時對組織工程化的人工神經的仿生構建也具有參考意義。

1 材料與方法

1.1 標本準備

獲取自愿捐獻尸體的成人新鮮左側正中神經標本1例(從內、外側根組成正中神經處至橈骨莖突,長約47 cm)。將其固定在自行設計的支架上,用4根人長發(直徑約80 μm)等距離平行地固定在標本四周作為定位線,然后用OCT包埋劑將標本與定位線一起包埋,液氮速凍。

1.2

連續組織切片

將正中神經作連續冰凍組織切片(LEICA CM1850型冰凍切片機),切片厚度20 μm,切片間距為100 μm,共切取4650張切片。

1.3 染色前的切片掃描

為了防止因切片在染色后的定位點丟失或移位而導致重建的困難,染色前先以2 400 dpi的分辨率對原始圖像進行掃描(Epson 4990型掃描儀),以便染色前、后圖像上的定位點的對比配準,以保證定位點的準確性。

1.4 切片染色

將切片用乙酰膽堿脂酶(acetylcholinesterase, AChe)組織化學法進行染色,24 h即可。

1.5

圖像獲取

將染色后的切片以2 400 dpi的分辨率進行掃描,同時將所得JPEG格式的圖像輸入計算機。采用Photoshop CS 29.0將染色前、后的圖像進行定位點的比對,以保證定位點的原始可靠性。然后對圖像進行邊緣銳化、圖像增強,去除噪聲等二維處理,使圖像在進行輪廓分割時更易于識別。

1.6 三維重建于可視化

將所得系列染色后的二維圖像按順序逐幅輸入計算機后,采用作者研發的用于三維神經可視化的3D Nerve軟件系統進行三維重建,獲得正中神經干全長及內部各神經束的三維立體行徑圖譜。

2 結 果

2.1 正中神經連續斷面觀察

正中神經在不同斷面的神經束的數目以及位置變化均較大,各神經束均是混合束,未見有純粹的感覺束或運動束的出現。

2.1.1

起始部及上臂部 正中神經在內、外側根組成處呈橢圓形,神經束數量為17個,其中以運動神經纖維為主的混合束為6個,其余11個是以感覺神經纖維為主的混合束(圖1)。連續斷面觀察顯示神經束數量逐漸減少,在大圓肌下緣有神經束8個,均為混合神經束。在肱骨中段部位神經束數量減少到6個,繼續向下走行神經束數量又逐漸增加。

2.1.2

肘部 正中神經在肘關節部呈扁帶狀,與正中神經下行穿過旋前圓肌兩頭之間,受到肌肉的擠壓有關。由于 該處有骨間前神經及前臂淺組屈肌等分支加入,所以神經束數量有所增加。在肱骨內、外髁連線處神經束數量為14個,其中以運動神經纖維為主的混合神經束為9個,其余5個是以感覺神經纖維為主的混合神經束(圖2)。

2.1.3 前臂部及腕部

正中神經在前臂接近圓形,神經束組成數量不等的神經功能束組。連續的神經斷面觀察顯示正中神經在前臂神經束與束之間的神經纖維交錯較少,并且運動神經纖維有所增加。正中神經在腕部呈扁平狀,在橈骨莖突部位神經束的數量為21個,橈側有1個以運動神經纖維為主的混合束,其余20個均為混合束(圖3),為神經束數量最多的部位。與正中神經在腕部發出大量終末支分布于拇收肌以外的魚際肌、第l、2蚓狀肌以及掌心、魚際、橈側3個半指的掌面及其中節和遠節手指背面的皮膚相符合。

2.2 三維顯示

在正中神經三維可視化過程中,利用3D Nerve采用不同的顏色來標識區分不同的神經束,束的粗細按內部各神經束的實際粗細進行適當縮小,這樣可以看清正中神經內部的各神經束三維行徑(圖4)。為了更清晰地觀測正中神經內部各神經束的三維立體行徑,將正中神經全長等距離地分成九段進行三維顯示 (圖5)。

正中神經可視化結果能夠真實地再現正中神經干全長及其內部各神經束和束組的三維立體結構;形象地展示各神經束的交叉穿插、混合重組的變化規律;既能單獨顯示正中神經干或單個神經束的立體行徑,又能將二者疊加混合顯示,還能隱藏其它的結構,追蹤單個神經束或整個正中神經干,從而動態地展示正中神經內部神經束的復雜結構(圖6)。通過3D Nerve,重建的正中神經能在空間位置上繞任意軸旋轉任意角度,或者以不同的速度連續旋轉,便于從不同的角度對各神經束的形態、空間位置及相互毗鄰關系進行觀察;還可在任意斷面進行任意角度的切割,并可在放大的視野下觀察正中神經的顯微結構(圖1~7)。圖1 正中神經內、外側根匯合部神經斷面示意圖 共有神經束17個,其中6個神經束是以運動神經纖維為主的混合束,其余11個神經束是以感覺神經纖維為主的混合束 圖2 正中神經在肘部肱骨內、外髁連線處神經斷面示意圖 共有神經束14個,其中9個神經束是以運動神經纖維為主的混合束,其余5個神經束是以感覺神經纖維為主的混合束 圖3 正中神經在橈骨莖突部神經斷面示意圖 共有神經束21個,橈側有1個以運動神經纖維為主的混合束,余20個均為混合束。圖1~3中A為該神經斷面的掃描圖片進行輪廓分割的示意圖(分辨率為2400 dpi),B為在3D Nerve中該神經斷面的輪廓匹配示意圖。淡藍色代表以感覺神經纖維為主的混合束;綠色代表以運動神經纖維為主的混合束;紫藍色代表混合神經束 圖4 正中神經起始部位,長5 cm。A為神經束中心線示意圖,每一中心線代表一神經束的走行行徑;B為神經束表面重建示意圖。正中神經內部神經束結構相當復雜,它們相互間不斷交叉重組,形成獨特的神經束網絡結構。采用不同的顏色來標識區分不同的神經束,束的粗細按內部各神經束的實際粗細進行適當縮小,這樣可以看清正中神經內部的各神經束三維行徑。C為包括神經外膜的表面重建示意圖。箭頭所指方向為近端至遠端的走行方向 圖5 A~I分別等距離顯示正中神經內部神經束的三維立體行徑(自正中神經內外側根匯合處至橈骨莖突)箭頭所指方向為近端至遠端的走行方向。采用不同的顏色來標識區分不同的神經束 圖6 A~C示在3D Nerve中進行從近端至遠端的正中神經追蹤的連續截圖 箭頭所指方向為近端至遠端的走行方向 圖7 A、B圖示從不同角度觀察圖6中E段正中神經的示意圖 便于從不同的角度對各神經束的形態、空間位置及相互毗鄰關系進行觀察。C圖示對E段正中神經行任意斷面切割的示意圖,可以觀測該斷面正中神經內各神經束的數量及分布位置。箭頭所指方向為近端至遠端的走行方向

3 討 論

3.1 正中神經三維重建與可視化的意義

周圍神經缺損的修復與重建是當前周圍神經外科領域的一大難題。目前臨床上應用骨骼縮短、神經改道、自體神經移植或移位等方法來進行神經缺損的修復。神經移植雖然效果尚可,但是神經來源有限,且遺留有供區感覺減退,移植神經直徑往往與受體神經不符等問題[7]。而組織工程化人工神經則有著明顯的優點:(1)不受來源限制,可被制成任意長度和口徑;(2)采用套接法將神經遠近端放置于神經管內,手術簡單,能有效避免吻合端神經瘤產生,并防止新生神經纖維向外生長,保護再生神經纖維有效地向遠端延伸[8]。因此,近年來人們開始用組織工程方法體外構建人工神經,即將體外培養擴增的大量的雪旺細胞和生物材料復合來引導周圍神經再生[9,10]。但是人工神經研制的重要前提條件是首先要明確神經的內部神經束的復雜交叉重組關系。只有按照人體神經內部天然精確結構來構建人工神經,才能獲得最佳的效果。本研究利用計算機真實地實現了正中神經的三維可視化,能準確地顯示正中神經內部每一神經束的各個斷面及其全長的解剖結構及其相互關系,各神經束中任意斷面的感覺與運動神經纖維的準確定位資料,因此對于組織工程化人工神經的仿生構建有著重要的指導意義。同時為臨床上正中神經損傷的修復方式的選擇提供一定的解剖參考意義。并且提供了一種周圍神經系統內部顯微結構三維可視化的有效方法,為中國虛擬人周圍神經系統的構建作了有益的探索。

3.2

定位方法

三維重建要準確顯示重建結構的空間形態,必須使連續切片的圖像有和原物體一樣的對應空間立體關系,即對圖像進行定位。 若定位不準確,重建的圖像就會失真。組織的連續冰凍切片在切片、染片的過程中不可避免地會產生一定的偏差,其位置的客觀性和準確性均受到一定的限制,所以需要通過設置參照的方法來保證切片的對位始終準確[11]。定位方法一般可分為外定位和內定位2種,這2種方法各有優缺點。所謂外定位方法,是指采用各種機械的方法在連續切片圖像上標記一些基準點,通過基準點的對齊來達到定位效果。陳增淦[12]等采用人長發作為外定位的材料,取得較好效果。而所謂內定位方法,是指根據生物組織的連續性和完整性,通過一定的配準算法達到兩幅連續切片圖像間的對齊。它具有靈活、準確度高和可進行回溯性研究等優點,所以是較有發展前途的一類定位方法。但是內定位并不足以解決一些非線性變形如切片的卷曲等情況,而且由于存在需要針對重建對象專門設計軟件、人機交互工作量及計算量均較大等問題,還有待改進,目前還無法完全替代外定位的方法。因此采用內定位和外定位相結合的方法,定位精度將更為理想,這是今后的發展方向[13]。

本研究將標本固定在自行設計的支架上,采用4根人長發作為定位線,分別等距離固定在神經四周,頭發切割后在切片上留下的點作為標志點。頭發直徑小,而且與玻片的粘附性較好,同時在玻片上用PolyLLysine涂層,增加了組織的粘附能力,這樣就保證了定位的準確性。作者認為這是計算機三維重建研究中一種準確而且實用的定位方法。

3.3 圖像的變形

圖像的變形也是圖像信息處理時經常會遇到的一個難題。正中神經的標本長約47 cm,而冰凍切片機最多允許的標本長度為2~3 cm,所以必須將標本分割成多個長3 cm左右的組織塊分別進行冰凍切片,將組織塊固定在冰凍切片機上時可能產生位置偏移,導致切片角度的細微差別。連續組織切片可能會產生皺褶、破損或不規則畸變。此外,在染色和掃描過程中也有可能會產生圖像的變形、旋轉和偏移。這些變形均可以通過四個定位點的位置用軟件進行還原,因為切片厚度僅為20 μm,可以認為這20 μm間距內的圖像信息幾乎是不變的,然后可以上一幅圖像為模板,對相應位置圖像信息進行校正,這樣可以獲得準確的原始圖像信息。

3.4 三維重建的方法

三維重建的方法主要分為2類,一類是基于中間幾何圖元的表面繪制法,另一類是直接基于三維數據場的體素繪制法[14]。

在本研究中,作者采用單輪廓線和多輪廓線之間的表面繪制法來進行重建,定義了三維神經表面的幾何信息,獲得了較好的外觀效果。同時,由于作者在正中神經的輪廓分割及匹配時采用了部分手工干預,從而有效地提高了準確性。

本研究首次應用3D Nerve較為成功地重建了正中神經的三維結構及其內部神經束的立體行徑,為臨床上正中神經損傷修復方式的選擇和組織工程化人工神經的仿生構建提供了有益幫助。同時還確定了一種應用周圍神經連續冰凍組織切片通過計算機輔助三維重建的實用方法,為數字化虛擬人神經系統的構建做出了有益的探索,所得的結果可以組合到中國數字化虛擬人數據庫中,豐富我國數字化虛擬人的研究,有較為廣泛的應用前景。

參考文獻

[1] 張晨陽,劉鄭生,唐金樹,等.用電刺激束支定位法修復遠端尺神經和正中神經損傷[J].中國矯形外科雜志,2000,9:900-901.

[2] Sunderland S.The intraneural topography of peripheral of the radial,median and ulnar nerves[J].Brain,1945,68:243.

[3] Jabaley ME.Internal topography of major nerves of the forearm and hand:a current view[J].J Hand Surg(Am),1980,5:1-18.

[4] Terzis JK,Brsdford L.A computerized study of the intraneural organization of the median nerve[J].J Hand Surg(Am),1984,9:605.

[5] Watchmaker GP,Gumucio AC,Crandall ER,et al.Fasciculus topography of the median nerve:a computer based study to identify branching patterns[J].J Hand Surg,1991,1:53-59.

[6] Meek MF,Stenekes MW,Hoogduin HM,et al.In vivo threedimensional reconstruction of human mediannerves by diffusion tensor imaging[J].Experimental Neurology,2006,2:479-482.

[7] 孟 浩,羅卓荊,馮林杰,等.新型神經支架材料的構建及其與骨髓基質干細胞復合的實驗研究[J].中國矯形外科雜志,2007,12:933-934.

[8] 宋修竹,顧玉東,徐建光,等.不同對位情況下神經直接縫合與小間隙套管法修復的療效比較[J].中華手外科雜志,1998,4:250-251.

[9] 程 飚,李伯休,陳崢嶸.雪旺細胞構建人工神經在大鼠長段神經缺損中的修復作用研究[J].中國矯形外科雜志,2007,12:1562-1565.

[10]陳 明,夏仁云.構建生物人工神經修復周圍神經缺損的實驗研究[J].中國矯形外科雜志,2003,8:536-538.

[11]Salvi J,Matabosch C,Fofi D,et al.A review of recent range image registration methods with accuracy evaluation[J].Image and Vision Computina,2007,5:578-596.

[12]陳增淦,陳統一,張 鍵,等.臂叢神經顯微結構的計算機三維重建[J].中華骨科雜志,2004,8:462-466.

第6篇:內部認購范文

    談到報業的人力資源管理,之前的研究者往往更多是聚焦于人力資源管理的某個具體模塊,而忽略了企業的溝通機制,尤其是內部溝通機制對于人力資源管理的重要性。正是基于這樣的背景,本文對報業內部溝通機制對人力資源管理的意義及內部溝通機制的提升對策進行探討和研究。

    一、企業內部溝通對人力資源管理的重要性

    管理是一門溝通的藝術,從一定意義上講,溝通就是管理的本質。溝通是為了一個設定的目標,把信息、思想和情感在個人或群體間傳遞,并且達成共同協議的過程。企業的溝通分為外部溝通和內部溝通。內部溝通是企業提高效率和信息資源共享的重要途徑之一。企業要獲得持續的發展,就必須以強有力的企業內部溝通網絡及時、準確、精要地將企業的目標及由此產生的具體措施與員工分享,以獲得他們的理解、認可與支持。而作為企業管理核心之一的人力資源管理,更是直接以一刻也離不開溝通的人為管理對象,可以說溝通尤其是企業內部溝通狀況,直接決定了企業人力資源管理的成敗,也對企業的戰略目標的實現與否有著重大而深遠的影響。

    溝通的功能從管理的角度看主要有交流、協調、激勵、控制等作用,主要表現在:

    1.交流功能

    一個良好的溝通機制將能有效地整合情感要素,充分尊重員工的感情需求,使員工能夠達成精神層面的充分交流,以調整好自己的位置、行為的位置和心態的位置,從而在員工內心深處激發起對企業的向心力、凝聚力和歸屬感,創造一種良好、和諧、積極向上的氛圍,從而推動企業文化的形成。而這也為企業人力資源管理工作的開展營造了良好的氛圍,創造了有利的環境。

    2.協調功能

    良好的內部溝通有助于正確處理組織內外各種關系,為組織正常運轉創造良好的條件和環境,從而促進組織目標的實現。首先,通過有效的溝通,人力資源參與組織戰略的形成。其次,有效溝通有利于提高人力資源管理決策的科學性與有效性。再次良好溝通有利于人力資源管理的實施。

    3.激勵功能

    溝通激勵是現代企業人力資源管理中最重要的非薪酬激勵。良好的內部溝通,一定程度上說明企業有著較高的員工參與度,有利于增強員工的責任感和主人翁意識,激發員工的工作熱情,提高員工滿意度,減少人才流失。此外溝通還是績效管理有效實施的重要管理工具,它貫穿于整個績效管理的四個環節——績效計劃、績效輔導、績效考核、績效結果的運用。可以說績效管理就是上下級間就績效目標的設定及實現而進行的持續不斷雙向溝通的一個過程。

    4.控制功能

    內部溝通是組織內部各層級之間信息流通的重要手段。通過申訴、舉報等方式,企業及時發現管理中存在的問題,并且形成一種無形的機制,對管理者進行有效的監督,實現內部控制功能。員工有了發表自己意見的正式途徑,也有利于員工的心理健康。

    二、企業內部溝通的種類和形式

    企業內部溝通根據傳播的方向可分為下行溝通、上行溝通、平行溝通;根據傳播媒介可分為語言溝通和非語言溝通;從溝通的有效性上分,溝通可以分為有效溝通和無效溝通;從管理角度分,溝通可分為戰略型溝通和戰術型溝通;從溝通的廣泛性上分,溝通可以分為個人溝通和群體溝通等。

    目前企業內部溝通常見的形式有:

    1.面對面交流 。面對面交流是最常見的溝通交流方式,上下級之間布置、報告工作,同事之間溝通協調問題,經常都采用這種方式。

    2.電話。上下級之間、同事之間借助電話這一傳播工具進行的有聲交流方式

    3.會議。定期不定期的舉行會議是內部溝通的重要方式。

    4.文件。公司下發有關文件是典型的下行溝通。對于與員工利益密切相關的或者需要員工共同遵守的文件,必須與員工進行徹底溝通,確保執行到位。

    5.業務報告。報告無論是口頭上的還是書面上形成文字的,都屬上行溝通,一般需要批復或口頭上給予反饋,從而形成上下信息交流上的互動。

    6.內部報刊。很多企業都通過辦內部報刊來增進企業與員工之間的溝通。

    7.舉辦各種活動。通過舉辦各種活動如演講比賽、各種勞動競賽、講座、專題培訓等,可以有效地促進企業與員工及同事之間的溝通。

    8.內部辦公系統、電子論壇、即時通訊系統。這些電子交流平臺在方便辦公的同時,也使內部溝通和員工交流更加便捷和順暢,節約了溝通成本。

    除了上述形式的溝通之外,對于非語言溝通也應引起我們重視,比如面對面交流時的雙方的穿著、舉止及其相關禮儀也非常重要,會直接影響企業管理過程的效果。此外,員工對辦公環境、工作氣氛的感受,其實也是一種溝通。

    三、報業內部溝通機制提升的對策及思路

    我國報業作為一門行業和產業,具有其特殊性。它脫胎于事業單位體制,直到二十世紀八十年代,才開始內部經營體制的改革,如自辦發行、實行事業單位企業化管理等。1996年1月,廣州日報報業集團掛牌成立,成為國內第一家報業集團,標志著中國報業進入集團化經營時代。隨著報業集團化經營的發展,通過自主發展和兼并重組等方式,報業集團的規模越來越大,內設機構和下屬單位增多,容易造成內部條塊分割嚴重,內部溝通不暢,交易成本上升。為有效提升內部溝通,必須注重以下幾個方面:

    1.確定溝通標準

    任何的溝通只有在有了標準的情況下才有意義,而衡量任何溝通活動的意義,都會最終追溯到企業的戰略和目標。隨著信息技術的不斷進步和新媒介形態的不斷出現和發展,網絡媒體和移動媒體發展迅猛,傳統報業面臨越來越大的挑戰。很多單位薪酬待遇相對下降,導致員工的士氣受到打擊,容易產生一些消極和低落情緒,優秀人才流失現象加劇。在此情況下,通過令員工聚焦于集團的目標,集團可以在目標一致的基礎上建立起以目標為導向的企業文化。從這個方面來說,企業必須首先要構建好自身的業績管理體系,通過設置明確、科學的業績目標,用以指導企業行為,包括溝通行為。

    2.建立合理的組織機構

    如果組織機構過于龐大,中間層次太多,那么,信息從最高決策傳遞到下屬單位不僅容易產生信息的失真,而且還會浪費大量時間,影響信息的及時性和溝通效率。有的學者統計,如果一個信息在高層管理者那里的正確性是100%,到了信息的接受者手里可能只剩下20%的正確性。為此需要加大力度,對報業內部行政、采編及經營單位的結構調整和資源整合力度,盡可能減少管理層級,實現扁平化管理,從而提高運行效率,降低溝通成本,減少溝通壁壘和障礙。

    3.強化內部培訓

    強化培訓是為了在企業的內部構建一種統一的溝通風格和行為模式,減少因溝通形式不一而造成的摩擦。通過培訓可以將一些概念性的東西固定下來,形成大家一說出口就能被理解的企業話語。參照GE等跨國企業的做法,目前國內的華為、騰訊等公司,都組建了企業大學或學院,負責對員工進行各種培訓。通過這些培訓,一方面讓企業管理人員學習必要的管理技能、業務技能、溝通技能等;另一方面也統一了大家的意識和管理理念,為企業內部的有效溝通與執行奠定良好基礎。

    4.健全內部溝通渠道,完善反饋機制

    尤其要重視網絡等新的傳播手段和溝通渠道的作用。此外一些以前不受重視的非正式溝通,如今發揮的積極作用越來越明顯,比如現在所流行的柔性溝通是以人為出發點和中心,圍繞著激發和調動人的主動性、積極性、創造性展開的,以實現個人和企業共同發展的一系列管理溝通活動,更在很大程度上適應了企業發展的需要。 此外,企業還應注重溝通反饋機制的建立,使自上而下的溝通和自下而上的溝通達到平衡。具體到人力資源管理方面,從新員工進入公司到被任用、從員工成長到期間的異動、乃至離職,溝通可以隨著員工的系列變遷過程細分為“入職前溝通、崗前培訓溝通、試用期間溝通、轉正溝通、調崗溝通、定期考核溝通、離職面談、離職后溝通管理”等八個方面,從而構成一個完整的員工成長溝通管理體系,以改善和提升人力資源管理水平、為公司領導經營管理決策提供重要參考信息。

    5.積極應對員工隊伍多元化帶來的影響

    在報業轉型過程中,人才的需求結構與原有業務格局和人才結構反差較大,原本不受重視的經營管理、技術開發、財務管理、審計、法律等人才需求空前旺盛,但這些人才恰恰是集團短缺的人才。為了在市場中贏得競爭優勢,必須充分利用多元化的員工隊伍所產生的能量,包括年齡、性格、國籍、宗教信仰、文化背景等,員工隊伍的非同質性程序越來越高,需求也更加多元化。而人力資源管理者應更加注重培養與這些多元化背景的員工進行有效溝通的能力,最大限度地發揮這些多元化員工隊伍的能量,進而提升集團在外部的形象和聲譽,在留住人才的同時,也吸引外部更多的人才。

    參考文獻:

第7篇:內部認購范文

關鍵詞 預約合同 繼續履行 實務案例

一、預約合同的含義

所謂預約,或稱為預備性契約,是指當事人約定為在將來一定期限內訂立合同而達成的允諾或協議。根據《布萊克法律詞典》的定義,“預約,是指由一個人做成的契約或約定,它具有排除這個人合法的進入另一項性質相同的合同的屬性。將來應訂立的合同成為本合同,而約定訂立本合同的合同則為預約合同。2012年6月5日,最高人民法院公布的《關于審理買賣合同糾紛案件適用法律問題的解釋》(法釋[2012]8號,簡稱《買賣合同司法解釋》第2條規定:“當事人簽訂認購書、訂購書、預訂書、意向書、備忘錄等預約合同,約定在將來一定期限內訂立買賣合同,一方不履行訂立買賣合同的義務,對方請求其承擔預約合同的違約責任或者要求解除預約合同并主張損害賠償的,人民法院應予支持。從該條規定可以看出,所謂預約就是約定在將來一定期限內訂立合同。從這上面解釋可以看出預約合同本身就是一種契約,它的標的即訂立契約的行為目的是確保將來與相對人訂立特定的合同。預約合同是具有獨立性、期限性、內容應當明確具體、諾誠性等特征。

二、實務案例評析

預約合同當事人若未按合同約定誠信地履行應盡義務,依法應承擔違約責任。《合同法》規定了違約責任的形式主要包括繼續履行、采取補救措施、賠償損失、減少價金等等。實踐中,有關預約違約責任爭議頗大,尤其集中在繼續履行這一問題上,下文著重分析法院對此問題的不同態度。

(一)肯定的態度

法院對預約合同是否適用繼續履行的問題持肯定態度并不多見,筆者在所能搜集到的法院判決書中,見到的唯一的一個判決強制當事人締結本約的是”陳小紅訴浙江福田房地產開發有限公司房屋認購合同糾紛案。

案例1:2000年11月11日,陳小紅與福田公司簽訂了《福田花園預定單》,雙方就房屋的面積、單價及交房日期均已達成合意,并約定陳小紅應在接到福田公司通知后10日內與其簽訂商品房預售合同。而福田公司隨后向陳小紅發出一份通知,稱由于成本增加,僅愿以時價的九成出賣房屋,若陳小紅不愿購買,福田公司欲雙倍返還訂金。陳小紅對此表示反對并要求福田公司按原協議繼續履行。雙方協商未果,陳小紅遂訴至法院,請求判令違約方繼續履行預約合同。

原審法院以雙方未能達成合意,即該預訂單之簽訂商品房預售合同的目的無法實現為由,駁回了陳小紅的訴訟請求。陳小紅不服一審判決,遂向浙江省高級人民法院提起上訴。

經省高院審理后認為,雙方當事人簽訂的預訂單已具備了商品房買賣合同的主要條款,且依據預訂單之約定,所謂簽訂商品房預售合同,僅需雙方辦理有關的合約手續,預售合同的主要條款以預訂單為準,而其他條款則依商品房預售合同的格式文本和交易習慣而定。因此,并不存在法律上或事實上不能履行的情形,故判令福田公司繼續履行《福田花園預訂單》。

案例3:2003年5月5日,瀏陽市某有限公司(原告)與王B(被告)簽訂《瀏陽市農副產品大市場蔬菜肉禽水產批發城(二期工程)內部認購單》,雙方約定了被告認購門面的面積、房款及付款方式,同時還約定了簽訂《內部認購單》后,在蔬菜肉禽水產批發城正式公開發售十日內簽署《商品房買賣合同》。其后,被告雖多次催促原告交付門面,但最終都因原告未取得“商品房預售許可證明“而未能履行。原告遂與被告協商退還其交付的定金,但被告堅持要求交付門面。雙方協商未果,原告訴至法院,請求法院判令解除合同。

法院認為,本案中《認購單》性質為預約合同。”商品房預售許可證明“雖為法定的商品房預售的前置條件,但不影響預約合同的效力。因該《認購單》系雙方的真實意思表示,且不違反法律、行政法規的規定,故應認定為有效,被告可以請求原告履行訂立《商品房買賣合同》的義務。但原告尚未取得許可證明,則無法簽訂《商品房買賣合同》,故判決解除《內部認購單》。

(二)否定的態度

較之肯定的態度,大多法院卻不贊成預約合同適用繼續履行。

案例3:蔣新瓊(原告)與郴州市蘇仙區城鎮建議綜合開發公司(被告)于2007年4月13日簽訂“房屋內部認購書”,約定了認購房屋的面積、價款等內容。2011年11月18日,雙方就所購房屋再次簽訂“內部團購協議”,約定雙方于2012年3月30日前簽訂《商品房買賣合同》。后由于開發項目名稱改變,被告表示愿與原告重新簽訂“認購協議書”《但房屋面積及價款均要增加,原告則表示重新簽訂協議,但只愿意增加面積,不愿意增加價款。雙方協商未果,原告訴至法院,請求法院“判令被告履行合同義務,以原協議中的價格與原告簽訂商品房預售合同。”

第8篇:內部認購范文

本案工程貴司暫定銷售周期最長不超過16個月,因而根據現在市場實際情況,未來市場發展方向,我們把項目的整個營銷周期化分為以下幾個階段。籌備期:通過營銷推廣策劃,明確營銷推廣的總體思路和策略,對營銷推廣實施組強,作出初步安排和計劃,通過售樓中心和工地現場的建設包裝,樹立樓盤初步信息,反饋市場信息。

引銷期:(分為內部認購期和開盤期)通過對樓盤綜合形象的樹立和推廣,提高樓盤市場知名度,向公眾灌輸項目的主題思想,了解市場反應,市場實際需求,檢討價格策略和推廣策略。針對市場的不同需求,以針對性的“賣點”進行推廣。引導消費者對樓盤的關注和認同。核對目標客戶群的劃分,針對“賣點”制定更有針對性的推廣策略。

強銷期:針對已對樓盤形成初步認同的消費者。通過樣板房參觀活動,業主聯誼活動,通過對工程進度、工程質量、物業管理、會所設施、企業文化等綜合宣傳,進一步強化消費者的認同感,促使消費者購買行為的完成。

續銷期:針對消費者對樓盤認為存在的問題,通過各種促銷活動,作針對性的宣傳銷售。

清盤期:在樓盤銷售尾期,對樓盤的環境實景加以報導宣傳,對開發商實力加以肯定。聘請知名物業顧問公司加盟物業管理,擴大物業管理公司宣傳力度,最終完成項目清盤。

二、銷售階段劃分

20__.4.1-20__.5.30籌備期

20__.6.1-20__.7.1內部認購期

20__.7.2-20__.10.30開盤期

20__.11.1-20__.3.30強銷期

20__.4.1-20__.6.30續銷期

20__.7.1-20__.9.30清盤期

20__.4.1-20__.5.30籌備期

任務:入市策略擬定,相關資料準備,辦理入市手續

工作重點:

1、建筑設計定案

2、園林景觀定案

3、會所項目定案

4、藝術大堂定案

5、行銷策略定案

6、研究市場實時情況

7、召開動腦會議

8、擬定公開(PR)或促銷()計劃

9、確定產品推廣的造勢活動

10、售樓資料(戶型圖、售樓書、認購須知、價格表、項目說明、貸款利率表等)準備齊備

11、公關活動籌備定案及實施

12、接待中心及樣板房設計制作

13、炒作項目特色

14、廣播搞制作

15、電視廣告制作

16、報紙廣告制作

17、銷售人員招聘與培訓

18、現場POP設計

19、確定銷售組織架構

20、工地圍墻設計制作

21、路牌廣告制作,引起注意,吸引客戶

22、車身廣告制作

23、模型廠家定案制作

20__.6.1-20__.7.1內部認購期

任務:

1、散布擴大知名度

2、告知業界與媒體造成耳語傳播

3、攔截其他競爭物業客源

4、極力塑造產品形象,引發消費者一窺究竟的欲望

工作重點:

1、對來客散播耳語,使客戶介紹客戶,以醞釀待購客戶群體

2、公開前的引導,以使目標/:請記住我站域名/客戶停止購買周邊同質樓盤

3、預收訂金,而于公開發售當日于現場補足首期款,簽定購房合同,形成公開當日購買熱潮

4、報紙廣告定案刊出

5、電視、電臺廣告定案播出

6、先期海報散發

7、商品房預售許可證辦理完成

8、售樓現場制作完成

9、銷售人員進場

10、公關活動具體實施

20__.7.2-20__.10.30開盤期

任務:

1、一舉豐收前期醞釀成果,造成現場購買人氣旺盛的局面

2、將銷售成績迅速公布于眾,震撼目標客戶,誘發其購買欲望

3、配合公關活動聚積人氣

工作重點:

1、收集客戶資料及聯絡以往記載客戶,營造現場氣氛,并檢討客戶反應以修正銷售及廣告路線

2、模型進場,備齊各種銷售資料

3、反復講習銷售教材及答客問

4、所有廣告媒體量達到高峰,隆重公開本項目

5、通知已繳訂金的客戶到售樓現場補足首期款,簽購房合同

6、價格表上市

7、樣板房制作完成(根據售樓部面積大小決定是否制作)

20__.11.1-20__.3.30強銷期

任務:

1、加強客戶介紹

2、舉辦各種業主活動,利用客戶耳語推廣

工作重點:

1、客戶追蹤

2、戶外媒體再加強

3、電臺、電視廣告頻數加大

4、加強現場銷控及炒作

5、針對所有客戶,大量使用各種媒體

6、針對銷售情形,分析市場,修正廣告

7、利用已訂客戶介紹客戶,并積極追蹤,促成成交

8、報紙廣告更具針對性,賣點更為突出

9、舉行封頂儀式,增加客戶信心及公司聲譽

20__.4.146-20__.6.30續銷期

任務:

1、針對目標客戶集中區域加強海報派夾

2、電話追蹤有望客戶

3、加強補足,簽約工作

工作重點:

1、延續銷售氣勢

2、過濾客戶資料,追蹤客戶,掌握回籠客戶

3、持續跟催補足及簽約

4、研討未售出戶型的原因,調整廣告媒體戰略

5、舉行會所及空中花園落成儀式,加大環境宣傳

6、繼續發動客戶介紹客戶

7、舉辦質量促銷活動

20__.7.1-20__.9.30清盤期

任務:

1、清理尾盤

2、安排物業管理公司進場

3、做好交房工作

工作重點:

1、開動腦會議,研究滯銷樓盤對策

2、調整媒體宣傳方式,重點攻擊

3、加大項目實景形象,公司品牌形象的宣傳力度

4、在會所內舉辦大型社區文化活動,引導物業公司進場

5、加強補足,簽約工作

6、準備交房資料,確定交房具體時間

7、核準項目實物與前期承諾是否有矛盾之處

8、做好交房工作,并加大宣傳力度,讓未買房者堅定信心

第9篇:內部認購范文

【關鍵詞】 胃癌

【Abstract】 AIM: To identify and analyze a peptide binding specifically to blood vessels of human gastric cancer by phage displayed C7C peptide library in vivo and to model its three dimensional structure of the peptide by computer. METHODS: Animal models were established using subrenal capsular assay (SRCA) in immunosupressed mice implanted with human gastric cancer xenografts. The phage displayed C7C peptide library was injected intravenously into mice. After 4 rounds of selection, 14 clones were picked up randomly and sequenced inpidually. The homing ability to human umbilical vein endothelial cells (HUVEC ) of peptide CGNSNPKSC was determined by cellELISA, with SGC7901, Eca109, LoVo and HepG2 cells as control. Its three dimensional structure of peptide CGNSNPKSC was also established by computer modeling techniques. RESULTS: Fourteen clones were obtained and they displayed two kinds of peptides. The binding ability of a cyclic peptide of CGNSNPKSC toward HUVEC was higher than that of SGC7901, Eca109, HepG2 and LoVo cells. The three dimensional structure of the peptide of CGNSNPKSC was modeled successfully. CONCLUSION: The peptide of CGNSNPKSC has high binding ability to HUVEC and its stable structure and highly hydrophilic character help it form a flexible epitope of antigen. The peptide of CGNSNPKSC can be used in target therapy of tumor angiogenesis.

【Keywords】 gastric cancer; phage displayed peptide library; angiogenesis; peptides; structure modeling

【摘要】 目的: 利用噬菌體隨機環七肽庫在小鼠腎包膜下荷人胃癌模型體內篩選能夠與人胃癌血管內皮細胞結合的特異性分子,對其多肽進行計算機空間結構模擬分析. 方法:制備免疫抑制小鼠腎包膜下人胃癌移植瘤模型,用隨機環七肽庫在其體內進行4輪篩選,對隨機獲得的14個克隆進行測序. 通過細胞ELISA檢測所得到的特異性小肽在臍靜脈內皮細胞(HUVEC),SGC7901,LoVo,Eca109及HepG2細胞系上的結合能力. 并通過計算機分子模擬多肽CGNSNPKSC的空間結構. 結果:成功獲得14個噬菌體克隆,并呈現出2種氨基酸序列,其中多肽CGNSNPKSC,相比于對照細胞SGC7901, LoVo, Eca109, HepG2,其同HUVEC結合能力明顯增強. 利用計算機技術成功地模擬并分析了該多肽的空間結構. 結論:多肽CGNSNPKSC同血管內皮細胞結合能力較強;空間結構穩定,是一個高親水多肽,更容易形成折曲的抗原表位,很有可能是一個極具腫瘤血管靶向治療前景的多肽.

【關鍵詞】 胃癌;噬菌體隨機肽庫;血管生成;多肽;結構模擬

0引言

大量實驗[1,2]證實,腫瘤生長、轉移和預后均與腫瘤血管關系密切,采用腫瘤血管抑制治療有以下幾個明顯優勢:①血管內皮細胞基因穩定,不易產生耐藥性;②毒副作用少,可長期用藥;③一種藥物可用于多種腫瘤;④無遺傳毒性,不造成繼發惡性變,利于長期使用. 因此尋找腫瘤血管特異表達分子進行特異性腫瘤血管治療具有十分重要的意義. 采用噬菌體隨機肽庫技術,可在欲篩選的靶標分子結構不明確的情況下,篩選出一些能與靶分子結合的特異性多肽[3,4]. 我們應用噬菌體隨機肽文庫篩選技術,在荷胃癌瘤組織的免疫抑制小鼠模型體內篩選能夠與胃癌移植瘤血管內皮相結合的多肽,旨在為胃癌血管抑制治療提供有效的作用靶點.

1材料和方法

1.1材料

1.1.1肽庫噬菌體隨機環七肽庫(Ph.D.-C7CTM Phage display peptide library):購自美國New England Biolabs公司,其滴度為1.5×1013噬斑形成單位(pfu),多樣性為2.7×109 transformants,在其插入隨機七肽序列兩端各添加一個半胱氨酸(Cysteine,C),這兩個半胱氨酸形成二硫鍵,從而使隨機七肽的空間結構相對穩定. 宿主菌為大腸桿菌E.coli 2738. 測序引物(96g sequencing primer)序列為: 5′HOCCC TCA TAG TTA GCG TAA CG3′.

1.1.2細胞系、動物及標本人胃腺癌細胞系SGC7901、人結腸癌細胞系LoVo、人食管癌細胞系Eca109與人肝癌細胞系HepG2均為第四軍醫大學西京醫院消化病研究所保存. 正常人臍靜脈內皮細胞(HUVEC)按參考文獻 [5]自行分離培養. BALB/c小鼠,20只,雌雄不拘,體質量20~22 g,由第四軍醫大學動物中心提供. 標本均來自西安交通大學第二醫院普外科胃大部切除或全胃切除,術前經活檢,本院病理科確診為胃低分化腺癌.

1.1.3其他試劑RPMI 1640培養基(Gibco公司);胎牛血清(Hyclone公司);HUVEC培養液(Cell Applications公司);抑蛋白酶肽(aprotinin)、亮抑制肽(leupeptin)、苯甲基磺酰氟(PMSF)、5′溴4‘氯3’吲哚βD半乳糖苷(Xgal)和異丙基βD硫代半乳苷(IPTG)(Sigma公司);辣根過氧化物酶標記的抗噬菌體mAb(HRPantiM13)(Pharmacia Biotech公司).

1.2方法

1.2.1噬菌體隨機環七肽庫的體內篩選和測序參照文獻[6]制備環磷酰胺(CTX)免疫抑制小鼠腎包膜下移植瘤小鼠模型(SRCA),將手術過程中獲得的胃癌組織切割成1 mm×1 mm×2 mm大小,植入小鼠腎包膜下. 術后第6日,戊巴比妥鈉150 mg/kg腹腔注射麻醉小鼠,750 mL/L乙醇浸泡5 min后,尾靜脈內注入1×1011 pfu的噬菌體環七肽庫,其余步驟同文獻[6]. 10 h后長出藍色噬斑后,隨機挑取約250個分隔良好的藍色噬斑,分別加入5 mL LB,37℃,250 r/min擴增12 h后進行噬菌體純化. 純化后的噬菌體經滴定計數后,以與前次相同的滴度注射入小鼠,用于再一輪篩選,如此重復4次. 將第4輪淘篩后的噬菌體液不經擴增,直接感染E.coli 2738鋪到LB瓊脂糖平皿上,10 h后隨機挑取分隔良好的14個藍色噬斑,加入2 mL LB培養液中,37℃振搖4 h,送上海生工公司進行測序.

1.2.2細胞培養及ELISA

1.2.2.1細胞培養SGC7901, LoVo, Eca109和HepG2細胞系均按常規進行細胞培養. 取健康順產婦臍帶按文獻[5]分離HUVEC,培養于HUVEC培養液中,并經抗人CD31 mAb染色證實分離細胞純度為90%以上. 實驗所用的HUVEC均使用傳一代細胞.

1.2.2.2細胞ELISA檢測全部培養細胞接種于96孔板至終密度為1×104/孔,1 g/L戊二醛固定細胞,10 g/L BSA封閉過夜;加入1×1011 pfu的呈現CGNSNPKSC多肽的噬菌體,37℃孵育2 h;經PBST重復洗滌3次,加入50 μL HRP antiM13 mAb(1∶3000),37℃孵育2 h;PBST洗滌4次后加入TMB,室溫30 min. 加入2 mol/L H2SO4終止反應,自動ELISA儀上測A450 nm值. 以PBS作為陰性對照. 以噬菌體隨機12肽庫(PHD12)(1×1011 pfu)作為陽性對照,每個樣本選取3個復孔. 采用公式S/N=樣品平均A450 nm值/PBS組平均A450 nm值,其中S/N≥2.1作為陽性結果,而S/N

1.2.3多肽的分子模建及預測表位分析采用GROMACS 3.2軟件包,對9個多肽進行能量最優化與分子動力學模擬. 整個模擬過程按如下步驟進行:運用最陡下降法(steepest descent method)對多肽進行2000步優化計算,以避免做分子動力學時原子間的不合理碰撞;在多肽周圍加上1 nm厚度的水層,保證其有足夠構象變化空間;對溶液狀態下的多肽設定pH=7;在298 K的恒定溫度下進行20 ps的分子動力學模擬(molecular dynamical simulation,MDS),模擬步長為1 fs,非鍵相互作用采用0.95 nm的截斷值(cut off),MDS得到的最后構象作為多肽在水溶液中的分析構象. 全部工作在RedHat Linux 9.0操作系統,CPU為AMD2500下完成.

2結果

2.1篩選和測序4輪篩選結束后,對隨機挑選的14個噬菌體克隆進行測序,其中的12個克隆呈現出CGNSNPKSC序列,2個克隆呈現CPHNLTKLC序列.

2.2細胞ELISACGNSNPKSC多肽對HUVEC結合能力明顯高于對SGC7901, LoVo, Eca109及HepG2細胞,接近于陽性對照噬菌體(Fig 1).

2.3CGNSNPKSC多肽的分子結構模擬及預測表位分析分析DMS的最終構象,如Fig 2所示,5個分子內氫鍵穩定了結構(其中二硫鍵是黃色實線,黃色虛線是分子內氫鍵). 2個半胱氨酸殘基形成1對二硫鍵結構,限制了分子柔性,形成了一個α螺旋(Fig 3的白色飄帶)與一個β轉角(Fig 3的紅色飄帶). 分析該肽的親水與疏水性,與水接觸的極性表面積為6.932 nm2(693.2平方埃),而疏水表面積僅為3.889 nm2(388.9平方埃),說明該9肽具有良好的親水性.

3討論

近20年的研究表明,腫瘤的發生和發展與腫瘤新生血管密切相關,尋找腫瘤血管特異性標志物是腫瘤血管靶向治療的關鍵. 然而,由于腫瘤血管的特殊性導致不能有效得到特異性的腫瘤血管標志物,如這些特異性分子只存在于腫瘤血管,在正常血管內皮細胞中不表達或者痕量級表達[7];分離和培養存在困難,至今尚未攻克;長期體外培養內皮細胞也會使其喪失特性;體內實驗多是在裸鼠體內進行,瘤塊的生長多是依靠腫瘤細胞自身的分裂,在一定程度內很少依賴新生血管,血管也多為小鼠源性而非人源性. 因此,在人體內進行直接篩選是最佳模式,但是這樣首先會受到倫理學的挑戰,可行性極差[8,9]. 為了能夠模擬腫瘤在人體內生存和生長的環境,我們利用免疫抑制小鼠制備了荷人胃癌組織移植瘤模型,并用噬菌體隨機環七肽庫對其進行了體內篩選,獲得兩條多肽,其中一條CGNSNPKSC多肽在14個克隆中呈現12次,說明該肽具有高選擇的特異性. 在不同腫瘤細胞和血管內皮細胞上的結合實驗也證實了這一點.

我們把CGNSNPKSC多肽序列輸入BLASTP中進行檢索,雖然發現該序列與已知蛋白在一級結構上沒有同源性,但不排除CGNSNPKSC多肽同某種血管內皮相關蛋白的功能表位在空間結構上相同或相似. 按照氨基酸的理化性質來分析這段多肽序列,我們發現,除了構成二硫鍵的2個C為疏水性氨基酸外,其余7個氨基酸均為高親水性氨基酸,這種親水多肽更容易形成折曲的抗原表位[10]. 為了能夠更好了解該段多肽的空間結構,我們利用計算機技術對其三維結構進行了模擬,模擬結果也證實了這個多肽的空間結構相對穩定,僅僅9個氨基酸就構成了一個α螺旋以及一個β轉角,并具有較高親水性,說明該肽很有可能在空間結構和功能上高度模擬某種血管內皮相關蛋白,極具腫瘤血管靶向治療前景.

參考文獻

[1] Xue Y, Bi F, Zhang X, et al. Inhibition of endothelial cell proliferation by targeting Rac1 GTPase with small interference RNA in tumor cells [J]. Biochem Biophys Res Commun, 2004;320(4):1309-1315.

[2] Folkman J. Angiogenesis and apoptosis [J]. Semin Cancer Biol, 2003; 13(2):159-167.

[3] 秦鑫,趙寧,張英起,等. 人轉鐵蛋白受體結合肽的噬菌體肽庫篩選與鑒定[J]. 第四軍醫大學學報, 2004;25(12): 1117-1119.

Qin X, Zhao N, Zhang YQ, et al. Isolation and identification of a novel peptide binding to human transferrin receptor from phagedisplay library [J]. J Fourth Mil Med Univ, 2004;25(12):1117-1119.

[4] 萬一,石繼紅,韓葦,等. 腫瘤壞死因子α在噬菌體表面的呈現及鑒定[J]. 第四軍醫大學學報, 2004;25(6): 499-502.

Wan Y, Shi JH, Han W, et al. Display of TNFα on the phage surface and identification of recombinant phageTNFα[J]. J Fourth Mil Med Univ, 2004; 25(6): 499-502.

[5] Jersmann HP, Hii CS, Hodge GL,et al. Synthesis and surface expression of CD14 by human endothelial cells[J]. Infect Immun, 2001;69(1): 479-485.

[6] 王瑜,吳開春,聶永戰,等. 胃癌特異性血管結合多肽的體內篩選和初步鑒定[J]. 細胞與分子免疫學雜志, 2003; 19(5): 469-472.

Wang Y, Wu KC, Nie YZ, et al. Invivo screening and characterization of peptides specific for vasculature of gastric cancer [J]. Chin J Cell Mol Immunol, 2003; 19(5): 469-472.

[7] Bikfalvi A, Bicknell R. Recent advances in angiogenesis, antiangiogenesis and vascular targeting[J]. Trends Pharmacol Sci, 2002; 23(12): 576-582.

[8] Arap W, Kolonin MG, Trepel M, et al. Steps toward mapping the human vasculature by phage display[J]. Nat Med, 2002; 8(2): 121-127.

[9] Zurita AJ, Arap W, Pasqualini R. Mapping tumor vascular persity by screening phage display libraries [J]. J Control Release, 2003; 91(12): 183-186.

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